Diferència clau: gel d'apilament i gel de separació
Els termes gel d'apilament i gel de separació s'utilitzen per explicar la tècnica SDS-PAGE. SDS-PAGE o electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida és una tècnica de laboratori que s'utilitza per separar molècules de proteïnes en funció dels seus pesos moleculars. La teoria darrere de la tècnica és que les proteïnes amb diferents pesos moleculars mostren diferents taxes de migració; Les molècules de baix pes molecular migren més ràpidament mentre que les molècules d' alt pes molecular migren lentament. El medi per a la migració és un gel. Hi ha dos tipus de gels anomenats gel d'apilament i gel de separació. La diferència clau entre el gel d'apilament i el gel de separació és que el pH del gel d'apilament és de 6,8 mentre que el pH del gel de separació és de 8,8.
Què és Stacking Gel?
Stacking gel és un gel de poliacrilamida de concentració baixa que es col·loca a la part superior d'un gel de resolució més concentrat (gel separador) en la tècnica SDS-PAGE. El gel d'apilament s'utilitza per millorar la resolució de l'electroforesi. La resolució augmenta a causa de la diferència entre les concentracions de gel d'apilament i de gel resolent que afecten les proteïnes de la mostra. Com que la concentració de poliacrilamida en gel d'apilament és baixa, la mida dels porus és més gran. Això també ajuda a augmentar la separació.
El gel apilable és un gel de poliacrilamida solt amb porus grans d'aproximadament un 7% de poliacrilamida. Aquests porus no actuen com una barrera considerable per a les grans molècules de proteïnes. Per tant, aquest gel afecta lleugerament la mobilitat d'aquestes proteïnes. Això fa que la separació segons la mobilitat i la mida de les proteïnes concentrant-les entre dos gels.
Figura 01: Gel d'acrilamida SDS-PAGE
El pH del gel d'apilament és de 6,8. El seu pH és àcid que el del gel de resolució per 2 unitats de pH. Aquest pH implica una menor força iònica, per tant, una major resistència elèctrica. Això provoca la mobilitat de les proteïnes que altres partícules carregades presents al gel.
Què és el gel separador?
El gel separador o gel resolutori d'una tècnica SDS-PAGE és un gel de poliacrilamida altament concentrat que es col·loca a la part superior d'un gel d'apilament poc concentrat. El gel separador conté una gran quantitat de poliacrilamida (10%). El pH d'aquest gel es manté com a pH=8,8, que és un nivell de pH més alt que el del gel d'apilament.
Figura 02: un aparell d'electroforesi en gel
Quan les molècules de proteïnes arriben al gel de separació, la migració d'aquestes molècules es ralenteix perquè el gel de separació és un gel d' alta concentració amb una mida de porus petita que pot actuar com una barrera considerable per al moviment de les molècules de proteïnes.. Aquesta desacceleració permet que les altres proteïnes migrin lentament per posar-se al dia, donant lloc a una banda estreta i concentrada entre els dos gels.
Quina relació hi ha entre el gel d'apilament i el gel de separació?
Els tipus de gel apilable i gel de separació s'utilitzen al mateix aparell
Quina diferència hi ha entre el gel d'apilament i el gel de separació?
Gel apilable vs Gel separador |
|
| El gel apilable és un gel de poliacrilamida de concentració baixa que es col·loca a la part superior d'un gel de resolució més concentrat (gel separador) amb la tècnica SDS-PAGE. | El gel separador o gel resolutori d'una tècnica SDS-PAGE és un gel de poliacrilamida altament concentrat que es col·loca a la part superior d'un gel d'apilament poc concentrat. |
| Ubicació | |
| El gel apilador es col·loca sobre el gel de resolució (separador). | El gel separador es col·loca a la part inferior del recipient utilitzat per a l'electroforesi en gel. |
| Concentració | |
| La concentració de gel apilable és alta. | La concentració de gel separador és baixa. |
| Contingut de poliacrilamida | |
| El gel apilable conté aproximadament un 7% de poliacrilamida. | El gel separador conté aproximadament un 10% de poliacrilamida. |
| pH | |
| El pH del gel apilable és de 6,8. | El pH del gel separador és 8,8. |
| Mida dels porus | |
| El gel d'apilament té grans mides de porus. | Al gel separador hi ha porus de mida petita. |
| Resolució | |
| El gel apilable ofereix una millor resolució. | El gel separador ofereix una resolució deficient. |
Resum: gel d'apilament i gel de separació
El gel apilable i el gel separador són dos tipus de gels de poliacrilamida que s'utilitzen per obtenir una millor separació de les molècules de proteïnes en una mostra determinada. La diferència entre el gel d'apilament i el gel de separació és que el pH del gel d'apilament és de 6,8 mentre que el pH del gel de separació és de 8,8.
