La diferència clau entre la filtració en gel i la cromatografia d'afinitat és que la cromatografia de filtració en gel depèn de les diferències de pes molecular o de mida de la mostra d'analit, mentre que la cromatografia d'afinitat depèn de l'afinitat d'un analit amb un lligand immobilitzat.
El terme cromatografia en química analítica fa referència al procés de separació de components en una mescla mitjançant diferents tècniques. La cromatografia és un nom col·lectiu que representa diversos mètodes diferents de separació.
Què és la cromatografia de filtració en gel?
La cromatografia de filtració en gel és una tècnica analítica en la qual la separació dels components depèn de la diferència de pes molecular o mida. Aquesta tècnica també es coneix com a cromatografia d'exclusió de mida o cromatografia de tamís molecular. La tècnica de separació en aquest procés depèn de la capacitat diferent de les molècules de la mostra per entrar als porus del medi de filtració en gel.
A la tècnica de filtració en gel, la fase estacionària conté perles de material hidratat, semblant a una esponja, amb porus de dimensions moleculars que contenen una gamma estreta de mides. Si passem una solució aquosa formada per molècules de diferents mides per una columna que conté aquests "tamisos moleculars", les molècules que són més grans que els porus del medi de filtració es mouen ràpidament per la columna. En canvi, les molècules més petites entren als porus del gel i tendeixen a moure's lentament per la columna. Les molècules surten de la columna per ordre de mida molecular decreixent. Aquí, el límit d'exclusió del gel és la massa molecular de les molècules més petites que no poden penetrar els porus d'un gel determinat.
Hi ha diferents tipus de tècniques de filtració en gel, com ara el mètode de filtració indirecta en gel, la filtració en gel en estat estacionari, la diàlisi de perles de gel, etc. La cromatografia de filtració indirecta en gel és útil per determinar les hormones tiroïdals lliures. La cromatografia de filtració en gel en estat estacionari és una tècnica indirecta útil sobretot per a la mesura d'esteroides lliures com el cortisol, la testosterona, etc. La diàlisi de perles de gel, d' altra banda, és una modificació de la filtració de gel en estat estacionari que és comparativament més senzilla.
Què és la cromatografia d'afinitat?
La cromatografia d'afinitat és una tècnica analítica i un mètode de separació que depèn d'una interacció d'unió específica entre un lligand immobilitzat i el seu soci d'unió. Alguns exemples inclouen la unió anticossos-antigen, unió enzim-substrat i unió enzim-inhibidor. Per tant, aquesta tècnica té moltes aplicacions importants en la purificació d'àcids nucleics, la purificació de proteïnes a partir d'extractes cel·lulars i la purificació de la sang.
En aquesta tècnica, la propietat més important és la immobilització de lligands. Podem utilitzar diversos materials com acrilats i gel de sílice per a això. És important evitar la interferència estèrica de la molècula diana amb el lligand. A més, s'uneix un inhibidor a la fase sòlida. A aquest inhibidor l'anomenem espaiador. Clàssicament, un separador consta d'una cadena d'hidrocarburs.
La fase estacionària de la cromatografia d'afinitat conté el nucli, l'espaiador i el lligand. De vegades, també té un ió metàl·lic que s'acobla al lligand. La fase sòlida més preferida per a la fase estacionària en aquesta tècnica és el gel d'agarosa perquè es dispensa fàcilment per omplir i empaquetar la columna amb llits de resina de qualsevol mida, i és prou gran perquè les biomolècules flueixin lliurement dins i a través de les perles. Els lligands es poden unir covalentment al polímer de perles de diverses maneres. Els compostos espaciadors més comuns són el bromur de cianogen, l'epòxid, l'epòxid amb àcid C6 i la diamina. D' altra banda, el lligand que podem utilitzar difereix segons l'objectiu, per exemple, anticossos-antigen, ions ferro o alumini-fosfoproteïnes, avidina-biotina, glutatió-GST, proteïnes quelant-his-etiquetes, etc.
Quina diferència hi ha entre la filtració en gel i la cromatografia d'afinitat?
La cromatografia és una tècnica analítica important. La cromatografia de filtració en gel i la cromatografia d'afinitat són dues variacions importants de la cromatografia. La diferència clau entre la filtració en gel i la cromatografia d'afinitat és que la cromatografia de filtració en gel depèn de les diferències de pes molecular o de mida de la mostra d'analit, mentre que la cromatografia d'afinitat depèn de l'afinitat d'un analit amb un lligand immobilitzat.
Resum: filtració en gel vs cromatografia d'afinitat
Hi ha diferents tipus de tècniques cromatogràfiques segons la seva aplicació i la naturalesa de la mostra d'analit. La filtració en gel i la cromatografia d'afinitat són dos tipus de tècniques. La diferència clau entre la filtració en gel i la cromatografia d'afinitat és que la cromatografia de filtració en gel depèn de les diferències de pes molecular o de mida de la mostra d'analit, mentre que la cromatografia d'afinitat depèn de l'afinitat d'un analit amb un lligand immobilitzat.
