Diferència clau: RNASE A vs RNASE H
Les ribonucleases són nucleases que degraden específicament l'ARN en unitats més petites. Es poden dividir en dues categories; endoribonucleases i exoribonucleases. La endoribonucleasa és una endonucleasa que pot degradar l'ARN de cadena simple o doble cadena. Escinda els enllaços fosfodièster dins d'una cadena de polinucleòtids d'ARN. Els exemples són RNasa A, RNasa III, RNasa T1, RNasa P i RNasa H. L'exoribonucleasa és una exonucleasa que va degradar l'ARN eliminant els nucleòtids terminals de l'extrem 5' o 3' de la molècula d'ARN. Els exemples són RNasa R, RNasa II, RNasa D i RNasa PH. La diferència clau entre RNASA A i RNASE H és que la RNasa A és una ribonucleasa pancreàtica que degrada específicament l'ARN monocatenari en components més petits, mentre que la RNasa H és un enzim inespecífic que escinda l'ARN de l'híbrid ARN-ADN en unitats més petites mitjançant el mecanisme hidrolític.
Què és RNASE A?
La RNasa A és una ribonucleasa pancreàtica que escinda específicament els residus de citosina i uracil no aparellats a l'extrem 3' de l'ARN monocatenari. La RNasa H funciona a una concentració de sal més alta (concentració de NaCl 0,3 M o més). La reacció hidrolítica té dues etapes. Forma un producte fosforilat 3' mitjançant un intermedi monofosfat cíclic 2', 3'. Tot i que és específic de l'ARN monocatenari a una concentració de sal més alta, també pot degradar l'ARN i l'ARN de doble cadena en l'híbrid ARN-ADN a una concentració més baixa de NaCl (inferior a 0,3 M de NaCl).
Bruce Merrifield va sintetitzar per primera vegada aquest enzim. La RNasa A és un enzim molt popular en la investigació molecular. La RNasa A pancreàtica bovina és un exemple de la RNasa A. I és un dels enzims més resistents que s'utilitzen al laboratori. Aquest enzim no necessita un cofactor per a la seva activitat. És un enzim altament termoestable. La RNasa A és el primer enzim i la tercera proteïna a la qual es va detectar una seqüència d'aminoàcids correcta. Aquest enzim és molt petit amb 124 aminoàcids i una massa molecular de 12600da. I té quatre residus d'histidina (His 12 i His 119 que participen en la reacció catalítica).
Figura 01: la RNasa A
La RNasa A es pot aïllar bullint una mostra crua. Quan bull, tots els altres enzims degraden la RNasa A restant. La RNasa A és un enzim sorprenentment estable. Aquest enzim inhibeix amb la proteïna inhibidora de la ribonucleasa, els complexos de metalls pesants i vanadat d'uridina.
Què és la RNasa H?
La RNasa H és un enzim ribonucleasa inespecífic que pot degradar l'ARN en l'híbrid ARN-ADN mitjançant una reacció hidrolítica. La RNasa H escinda l'enllaç 3'- O-P de l'ARN en un híbrid ARN-ADN. Finalment, produeix productes terminats amb 3'OH i 5' fosfat. En la replicació de l'ADN té un paper fonamental eliminant el cebador d'ARN després de formar noves cadenes d'ADN. En condicions de laboratori, degrada específicament l'ARN en l'híbrid ARN-ADN però no l'ADN i l'ARN no hibridat. I aquest enzim s'utilitza normalment per destruir la plantilla d'ARN després que es formi la primera cadena d'ADN complementària durant la síntesi d'ADNc.
Figura 02: RNasa H
RNasa H també s'utilitza en assajos de protecció de nucleases. També es pot incorporar a l'eliminació de la cua de poli A de l'ARNm. La RNasa H té la capacitat de destruir l'ARN no codificant dins i fora de la cèl·lula. Els ions metàl·lics són necessaris com a cofactors per a aquesta activitat proteica. Es pot utilitzar un quelant (EDTA) per inhibir l'enzim RNasa H.
Quines similituds hi ha entre RNASE A i RNASE H?
- Tots dos són de naturalesa proteica.
- Tots dos són endoribonucleases
- Tots dos poden degradar l'ARN.
- Tots dos realitzen reaccions hidrolítices.
- Els laboratoris moleculars utilitzen tots dos.
Quina diferència hi ha entre RNASE A i RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNasa A és una ribonucleasa pancreàtica que escinda específicament l'extrem 3' dels residus no aparellats de citosina i uracil d'ARN monocatenari a una concentració de sal més alta. | RNasa H és un enzim ribonucleasa inespecífic que pot degradar l'ARN en l'híbrid ARN-ADN mitjançant una reacció hidrolítica. |
| Naturalesa de l'escissió de l'ARN | |
| RNasa A escinda específicament l'ARN monocatenari a una concentració de sal més alta. | RNasa H escinda l'ARN en l'híbrid ARN-ADN. |
| Necessitat de cofactors per a l'activitat | |
| RNasa A no necessita cofactors per a la seva activitat. | RNasa H necessita ions metàl·lics com a cofactors per a la seva activitat. |
| Inhibidors de l'activitat proteica | |
| La proteïna inhibidora de la ribonucleasa, els complexos de metalls pesants i vanadat d'uridina inhibeixen l'activitat de la RNAsa A. | Un quelant (EDTA) inhibeix l'activitat de la RNasa H. |
| Eliminació d'ARN primer en la replicació d'ADN | |
| RNasa A no s'utilitza per a l'eliminació de cebadors d'ARN en la replicació de l'ADN. | RNasa H s'utilitza per a l'eliminació de cebadors d'ARN en la replicació de l'ADN |
| Eliminació de plantilles d'ADN en la síntesi d'ADN complementari (ADN-C) | |
| RNasa A no s'utilitza per a l'eliminació de plantilles d'ARN durant la síntesi d'ADN complementari (ADN-C). | RNasa H s'utilitza per a l'eliminació de la plantilla d'ARN durant la síntesi d'ADN complementari (ADN-C). |
| Eliminació de Poly-A-Tail en ARNm hibridat amb oligo (dt) | |
| RNasa A no s'utilitza per eliminar la "cua poli-A" de l'ARNm hibridat amb oligo (dt). | RNasa H s'utilitza per eliminar la "cua poli-A" de l'ARNm hibridat amb oligo (dt) |
Resum: RNASE A vs RNASE H
Les ribonucleases són enzims nucleases que tenen la capacitat de tallar l'ARN en unitats més petites. Són de dos tipus; endoribonucleases i exoribonucleases. La endoribonucleasa és una endonucleasa que té la capacitat de degradar l'ARN monocatenari o bicatenari. I escinda l'enllaç fosfodièster dins d'una cadena de polinucleòtids d'ARN. La RNasa A i la RNasa H són dues endoribonucleases. La RNasa A és una ribonucleasa pancreàtica que escinda específicament els residus de citosina i uracil no aparellats a l'extrem 3' de l'ARN monocatenari a una concentració de sal més alta. La RNasa H és un enzim de ribonucleasa inespecífic que pot degradar l'ARN en l'híbrid ARN-ADN mitjançant una reacció hidrolítica. Aquesta és la diferència entre la RNasa A i la RNasa H.
Descarregueu el PDF RNASE A vs RNASE H
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons la nota de citació. Si us plau, descarregueu la versió PDF aquí Diferència entre RNASE A i RNASE H
