Diferència clau: nitrocel·lulosa vs PVDF
El Western blotting és un mètode que permet la detecció i quantificació de proteïnes específiques d'una mostra de proteïnes. La fiabilitat de la tècnica depèn de la selecció d'una membrana correcta per a l'absorció de proteïnes del gel. Hi ha diferents tipus de membranes microporoses. Les membranes de nitrocel·lulosa i PVDF són dues d'aquestes membranes preferides pels investigadors a causa dels seus atributs especials sobre els altres tipus de membranes. La selecció entre nitrocel·lulosa o PVDF també és un altre repte en el western blotting. Tant la nitrocel·lulosa com el PVDF tenen una alta capacitat d'absorció de proteïnes. La diferència clau entre la membrana de nitrocel·lulosa i la de PVDF és que les membranes de nitrocel·lulosa no tenen la capacitat d'eliminar anticossos i reutilitzar la membrana per a la reprovació d'anticossos, mentre que les membranes de PVDF tenen la capacitat de despullar i reutilitzar.
Què és la nitrocel·lulosa?
La nitrocel·lulosa és un polímer fabricat mitjançant el tractament de la cel·lulosa amb àcid nítric i s'utilitza per a la fabricació de membranes microporoses en biologia molecular, especialment per a tècniques de blotting com el southern, northern i western blotting. Les mides dels porus de les membranes de nitrocel·lulosa oscil·len entre 3 i 20 µm. Les membranes microporoses de nitrocel·lulosa faciliten la detecció de la reacció immunoquímica que té lloc a la superfície de la membrana. Per tant, les membranes de nitrocel·lulosa s'utilitzen freqüentment per a la immobilització de proteïnes i la detecció de proteïnes específiques en el western blotting. Les membranes de nitrocel·lulosa també poden immobilitzar glicoproteïnes i àcids nucleics.
Les membranes de nitrocel·lulosa es prefereixen en assajos de flux lateral a causa de diverses característiques. Les membranes de nitrocel·lulosa absorbeixen proteïnes a alta concentració. El dissolvent utilitzat per mullar la membrana no disminueix l'absorció de proteïnes de la membrana de nitrocel·lulosa. Les membranes de nitrocel·lulosa es poden tallar fàcilment a la mida de gel desitjada i transferir proteïnes del gel a la membrana mitjançant transferència elèctrica o capil·lar. La nitrocel·lulosa permet un flux més ràpid de proteïnes a través de la membrana amb un alt potencial d'unió. La nitrocel·lulosa mostra una força de manipulació millorada. Un altre atribut especial de la membrana de nitrocel·lulosa és que es pot enganxar fàcilment amb adhesius resistents a l'aigua sense dissolvents sobre diversos suports de plàstic.
Figura 01: Membrana de nitrocel·lulosa per a western blotting
Què és PVDF?
El difluorur de polivinilidè (PVDF) és un fluoropolímer produït per la polimerització de difluorur de vinilidè i té una alta capacitat d'immobilització de proteïnes. Per tant, les membranes microporoses fetes de PVDF s'utilitzen en tècniques de western blotting per analitzar proteïnes específiques de les mescles de proteïnes. Les membranes de PVDF també es poden utilitzar per a l'anàlisi d'aminoàcids i la seqüenciació de proteïnes. La característica més important de la membrana de PVDF sobre la membrana de nitrocel·lulosa és que es pot treure fàcilment els anticossos i reutilitzar-se per a sondes d'anticossos posteriors.
Les membranes de PVDF són més gruixudes que les membranes de nitrocel·lulosa; per tant, més resistent als danys durant la reutilització. Les membranes de PVDF són altament hidròfobes. Per tant, s'han de posar en remull en metanol o isopropanol abans d'utilitzar-los.
Quina diferència hi ha entre la nitrocel·lulosa i el PVDF?
Nitrocel·lulosa vs PVDF |
|
| La nitrocel·lulosa és un polímer compost per cel·lulosa. | PVDF és un fluoropolímer produït per la polimerització de difluorur de vinilidè. |
| Mida dels porus de la membrana | |
| Les mides típiques dels porus són 0,1, 0,2 o 0,45μ | Les mides típiques dels porus són 0,1, 0,2 o 0,45 μm |
| Capacitat d'unió de proteïnes | |
| La nitrocel·lulosa té una capacitat d'unió a proteïnes de 80 a 100 μg/cm2. | PVDF té una capacitat d'unió de proteïnes de 170 a 200 μg/cm2. |
| Sensibilitat | |
| Això té una sensibilitat baixa en comparació amb PVDF. | Això té una alta sensibilitat. |
| Detecció de proteïnes poc expressades | |
| Com que la sensibilitat és baixa a les membranes de nitrocel·lulosa, no és adequat per a la detecció de proteïnes poc expressades. | Això és més adequat per a la detecció de proteïnes poc expressades a causa de la seva alta sensibilitat. |
| Soroll de fons | |
| Això té menys soroll de fons | Això té un soroll de fons més elevat. |
| Interaccions amb proteïnes | |
| Les molècules de proteïnes s'uneixen a les membranes de nitrocel·lulosa mitjançant interaccions hidròfobes. | Les proteïnes s'uneixen a les membranes de PVDF mitjançant interaccions hidròfobes i dipols. |
| La naturalesa de la membrana | |
| La nitrocel·lulosa és fràgil i fràgil. Tanmateix, hi ha versions de nitrocel·lulosa disponibles i són resistents. | PVDF és més durador i té una major resistència química. |
| Capacitat de despullar i reutilitzar | |
| La nitrocel·lulosa pot tenir dificultats per despullar-se i reprovar sense perdre el senyal. | PVDF és ideal per a aplicacions de repetició i seqüenciació. |
| Idoneïtat | |
| La nitrocel·lulosa és ideal per detectar proteïnes de baix pes molecular. | PVDF és més adequat per detectar proteïnes de pes molecular més alt. |
| Altres usos | |
| La La nitrocel·lulosa es pot utilitzar per a l'anàlisi d'àcids nucleics i el tacat de punts/slots. | PVDF es pot utilitzar per a la seqüenciació de proteïnes i sistemes d'assaig en fase sòlida. |
| Cost | |
| Això és més barat que les membranes de PVDF. | Això és més car que les membranes de nitrocel·lulosa. |
| Necessitat de mullar prèviament | |
| Les membranes de nitrocel·lulosa no requereixen remull prèvia amb metanol | Les membranes de PVDF requereixen remullar prèviament amb metanol. |
Resum: nitrocel·lulosa vs PVDF
Les membranes de nitrocel·lulosa van ser les primeres membranes utilitzades comercialment per a l'anàlisi de flux lateral. Tenen una gran capacitat d'absorció de proteïnes. Per tant, les membranes de nitrocel·lulosa s'utilitzen en el western blotting. El PVDF és un altre tipus de membrana que s'utilitza en el western blotting i també té una alta capacitat d'absorció de proteïnes. Tots dos tipus s'utilitzen en western blot per a l'anàlisi de proteïnes. No obstant això, les membranes de PVDF tenen atributs més especials, cosa que les fa més adequades que les membranes de nitrocel·lulosa per al western blotting. Però, les membranes de nitrocel·lulosa són més adequades per detectar proteïnes de baix ponderat molecular, les membranes de PVDF són més adequades per detectar proteïnes de gran ponderació molecular. Aquesta és la diferència entre les membranes de nitrocel·lulosa i PVDF.
