Diferència clau: nitrocel·lulosa i membrana de niló
El blotting és una tècnica important per a la detecció de seqüències específiques d'ADN, ARN i proteïnes a partir de les seves mescles en biologia molecular. Es fa mitjançant una membrana anomenada blot. Hi ha diferents tècniques de blotting com el northern, southern i western blotting. La selecció d'una membrana adequada per al procés de borrat s'ha de fer amb cura per evitar unió inespecífica i deteccions incorrectes. La nitrocel·lulosa, el niló i el PVDF són membranes que s'utilitzen habitualment en tècniques de blotting. Tenen característiques diferents. La diferència clau entre la nitrocel·lulosa i la membrana de niló és que les membranes de nitrocel·lulosa tenen un alt potencial d'immobilització de proteïnes, mentre que les membranes de niló tenen un alt potencial d'immobilització d'àcids nucleics. No obstant això, ambdós tipus de membranes s'utilitzen freqüentment en tècniques de borrat.
Què és una membrana de nitrocel·lulosa?
La membrana de nitrocel·lulosa és un filtre de membrana que s'utilitza habitualment en tècniques d'absorció d'àcids nucleics i proteïnes. Té un alt potencial d'unió a proteïnes. Per tant, les membranes de nitrocel·lulosa s'utilitzen àmpliament en la tècnica de western blotting. Les membranes de nitrocel·lulosa són compatibles amb totes les tècniques d'hibridació i mostren capacitats d'unió superiors sense interferències. Les membranes de nitrocel·lulosa són de naturalesa hidròfila natural. Fan interacció hidròfila amb molècules i les immobilitzen de manera eficient a la membrana. Les membranes comercials de nitrocel·lulosa estan disponibles en dues mides de porus: 0,45 i 0,2 µm.
Figura 01: Membrana de nitrocel·lulosa utilitzada en western blotting
Què és una membrana de niló?
La membrana de niló és un altre tipus de membrana comercial que s'utilitza en tècniques de borrat. Alternativament, s'utilitza amb membranes de nitrocel·lulosa per a taques de southern i northern. Les membranes de niló són ideals per a la transferència sud que la nitrocel·lulosa a causa de la seva alta afinitat per unir-se amb l'ADN. A causa de diverses característiques úniques de les membranes de niló, els investigadors solen utilitzar membranes de niló per a la taca del sud i del nord en lloc de sobre la membrana de nitrocel·lulosa. Les membranes de niló també es recomanen per al desmuntatge i la repoblació, a diferència de la nitrocel·lulosa.
Figura 02: Membrana de niló utilitzada per a la taca del sud
Quina diferència hi ha entre la nitrocel·lulosa i la membrana de niló?
Nitrocel·lulosa vs membrana de niló |
|
| Les membranes de nitrocel·lulosa són trencadisses. | Les membranes de niló són menys trencadisses. |
| Maneig | |
| Són difícils de manejar. | Són fàcils de manejar. |
| Reprovació | |
| Les membranes de nitrocel·lulosa no admeses són difícils de resonar. | La repesca és fàcil amb membranes de niló. |
| Compatibilitat amb diverses condicions d'emmagatzematge | |
| Les membranes de nitrocel·lulosa tenen menys resistència per suportar diverses condicions d'emmagatzematge. | Les membranes de niló responen amb més robustesa a diverses condicions d'emmagatzematge. |
| Utilitzar | |
| Cal mullar prèviament. | La mullada prèvia no és necessària per a les membranes de niló. |
| Natura hidròfila | |
| Les membranes de nitrocel·lulosa són de naturalesa hidròfila, però són menys hidròfiles que les membranes de niló. | Són de naturalesa altament hidròfila. |
| Potencial d'immobilització | |
| Les membranes de nitrocel·lulosa tenen menys afinitat pels àcids nucleics. Però té una gran afinitat per les proteïnes. | Les membranes de niló tenen un alt potencial d'unió amb els àcids nucleics que les membranes de nitrocel·lulosa. |
Resum: nitrocel·lulosa vs membrana de niló
Les membranes de nitrocel·lulosa i niló són làmines especials que s'utilitzen en la tècnica de secant per reproduir el patró de bandes al gel. Permeten la possibilitat de detectar una seqüència concreta o una proteïna de les mescles immobilitzant-les a la membrana. Un cop immobilitzades les molècules a la membrana, es pot utilitzar com a substrat per a l'anàlisi d'hibridació amb sondes marcades. La membrana de nitrocel·lulosa s'utilitza habitualment per a la detecció de proteïnes en la tècnica de western blotting a causa de la seva alta afinitat d'unió amb les proteïnes. Les membranes de niló s'utilitzen sovint per a la taca del sud i del nord. Aquesta és la diferència entre la nitrocel·lulosa i la membrana de niló.
