Diferència clau: immunofluorescència i immunohistoquímica
El diagnòstic de mal alties, que utilitza mètodes biològics moleculars, s'ha convertit en una àrea emergent de la tecnologia del laboratori clínic. Inclou totes les proves i mètodes per identificar una mal altia i comprendre la causa d'una mal altia mitjançant l'anàlisi d'ADN, ARN o proteïnes expressades en un organisme. Els avenços ràpids en el diagnòstic molecular han permès la investigació bàsica sobre mal alties transmissibles i no transmissibles. S'utilitzen per determinar canvis en la seqüència o els nivells d'expressió en gens o proteïnes crucials implicades en la mal altia. La immunofluorescència (IF) i la immunohistoquímica (IHC) són dues tècniques molt utilitzades en biologia del càncer. L'IF és un tipus d'IHC on s'utilitza un mètode de detecció de fluorescència per analitzar anticossos monoclonals i policlonals, mentre que l'IHC utilitza mètodes químics per detectar els anticossos monoclonals i policlonals. Aquesta és la diferència clau entre IF i IHC.
Què és la immunofluorescència (IF)?
La immunofluorescència és una tècnica de detecció on els anticossos utilitzats en l'assaig s'etiqueten amb colorants fluorescents o proteïnes fluorescents per a la detecció. Els anticossos secundaris marcats poden donar lloc a senyals de fons no desitjats; per tant, la tècnica IF es basa en l'etiquetatge del propi anticòs primari actualment per tal d'evitar senyals no desitjats durant la detecció. Mitjançant aquesta tècnica, s'evita la unió inespecífica entre l'anticòs primari i secundari, i és més ràpida ja que no hi ha cap pas d'incubació secundari implicat. La qualitat de les dades també s'ha millorat.
Figura 01: tinció d'immunofluorescència doble per a BrdU, NeuN i GFAP
Els fluorocroms o colorants fluorescents són compostos que poden absorbir la radiació, preferiblement la radiació ultraviolada que s'excita. Quan les partícules arriben a l'estat fonamental des de l'estat excitat, emeten radiació que és capturada i detectada per un detector per formar un espectre. És de gran importància que l'etiqueta fluorescent sigui compatible i estable per a la reacció particular i s'ha de conjugar adequadament amb l'anticòs per tal d'obtenir resultats precisos. Un dels fluorocroms més utilitzats és l'isotiocianat de fluoresceïna (FITC), que és de color verd, amb longituds d'ona màximes d'absorció i emissió de 490 nm i 520 nm, respectivament. La rodamina, un altre agent utilitzat en IF, és de color vermell i té diferents longituds d'ona d'absorció i emissió de pics de 553 nm i 627 nm.
Què és la immunohistoquímica (IHC)?
IHC és un mètode de prova molecular practicat per identificar i confirmar la presència de l'antigen a la cèl·lula diana. La cèl·lula diana podria ser una partícula infecciosa, un patogen microbià o una cèl·lula tumoral maligna. IHC utilitza anticossos monoclonals i policlonals per determinar la presència d'antígens presents a la superfície cel·lular de les cèl·lules diana. La tècnica es basa en la unió antigen-anticossos. A aquests anticossos es conjuga un marcador de detecció per detectar la presència o l'absència de l'antigen en particular. Aquests marcadors poden ser marcadors químics com ara enzims, anticossos fluorescents o anticossos radiomarcats.
Figura 02: rodanxa de cervell de ratolí tacada per immunohistoquímica
L'aplicació més popular de l'IHC és en biologia cel·lular cancerosa per identificar la presència de tumors malignes, però també s'utilitza per a la detecció de mal alties infeccioses.
Quines similituds hi ha entre la immunofluorescència i la immunohistoquímica?
- La immunofluorescència i la immunohistoquímica tenen lloc en condicions in vitro.
- Les dues tècniques es basen en l'antigen-anticòs
- Totes dues són tècniques molt ràpides.
- Els resultats de les tècniques són reproduïbles.
- Tots dos han millorat la qualitat de les dades.
- Aquestes tècniques s'utilitzen en el diagnòstic de càncer i mal alties infeccioses.
Quina diferència hi ha entre la immunofluorescència i la immunohistoquímica?
Immunofluorescència vs immunohistoquímica |
|
| IF és una tècnica de detecció on els anticossos utilitzats en l'assaig s'etiqueten amb colorants fluorescents o proteïnes fluorescents per a la detecció. | IHC és una tècnica de detecció on els anticossos utilitzats en l'assaig s'etiqueten utilitzant productes químics o elements radioactius per a la detecció. |
| Precisió | |
| La precisió és més alta en la tècnica IF en comparació amb l'IHC. | La precisió és menor a IHC. |
| Especificitat | |
| IF és més específic. | IHC és menys específic. |
Resum: Immunofluorescència versus immunohistoquímica
Els mecanismes moleculars han provocat molts canvis en el camp de la medicina, donant lloc a mètodes avançats de prova molecular que han suposat revolucions en el camp del diagnòstic. Aquests invents han donat lloc a una identificació i confirmació ràpida i precisa de la mal altia, permetent així l'administració i producció de fàrmacs amb èxit. Aquestes tècniques també s'utilitzen en farmacologia per trobar les dianes dels fàrmacs i confirmar les propietats farmacocinètiques del fàrmac durant el metabolisme del fàrmac. L'IF i l'IHC són dos mètodes de diagnòstic que es basen en el concepte d'unió d'antigen i anticossos, encara que el mode de detecció en ambdues tècniques difereix. IF utilitza el principi de fluorescència per detectar l'antigen i IHC utilitza el concepte de conjugació química per detectar l'antigen. Aquesta és la diferència entre IF i IHC.
Baixa la versió PDF d'Immunofluorescència vs Immunohistoquímica
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons la nota de citació. Si us plau, descarregueu la versió PDF aquí Diferència entre la immunofluorescència i la immunohistoquímica.
