La diferència clau entre la immunofluorescència directa i indirecta és que la immunofluorescència directa utilitza un sol anticòs que funciona contra l'objectiu d'interès, mentre que la immunofluorescència indirecta utilitza dos anticossos per etiquetar l'objectiu d'interès.
La immunofluorescència o la imatge cel·lular és una tècnica que s'utilitza per etiquetar un antigen objectiu específic amb un fluoròfor. Aquí, el fluoròfor és un compost químic fluorescent que pot reemetre llum quan l'excita la llum. Quan un fluoròfor s'uneix a l'antigen diana, permet la detecció de la molècula diana a la mostra. Per descriure-ho més, quan un antigen s'uneix a un anticòs específic, es pot conjugar amb fluoròfors. Per tant, és fàcil detectar la presència de l'antigen diana a la mostra quan s'observa al microscopi de fluorescència.
A més, hi ha dos tipus d'immunofluorescència; immunofluorescència directa i indirecta. La diferència entre la immunofluorescència directa i indirecta rau principalment en el nombre d'anticossos utilitzats i la conjugació amb fluoròfor. És a dir, en la immunofluorescència directa, el fluoròfor es conjuga directament amb l'anticòs primari, mentre que en la immunofluorescència indirecta, el fluoròfor es conjuga amb l'anticòs secundari.
Què és la immunofluorescència directa?
La immunofluorescència utilitza anticossos per detectar antígens diana específics. La immunofluorescència directa és un dels dos tipus d'immunofluorescència. En la immunofluorescència directa, un únic anticòs (anticòs primari) implica i el fluoròfor es conjuga directament amb l'anticòs primari. En unir l'anticòs amb l'antigen objectiu, el fluoròfor emet fluorescència que es pot detectar mitjançant un microscopi de fluorescència.
Figura 01: immunofluorescència directa
No obstant això, la immunofluorescència directa és un mètode car, ja que els anticossos conjugats primaris són costosos en comparació amb els anticossos secundaris. No obstant això, no implica un pas addicional, per tant, una tècnica més curta. A més, les unions inespecífiques es redueixen en la immunofluorescència directa. Per tant, la reactivitat creuada de les espècies és baixa. Però en la detecció, la sensibilitat de la immunofluorescència directa és feble en comparació amb la immunofluorescència indirecta.
Què és la immunofluorescència indirecta?
La immunofluorescència indirecta és el segon tipus d'immunofluorescència que implica dos tipus d'anticossos com els anticossos primaris i secundaris en l'etiquetatge de l'antigen diana. En aquest mètode, el fluoròfor es conjuga amb l'anticòs secundari. Per tant, aquesta tècnica implica un pas addicional.
Figura 02: Immunofluorescència
No obstant això, la sensibilitat és alta en aquest mètode, ja que es poden conjugar diversos fluoròfors amb anticossos secundaris i en facilita la detecció. A més, la immunofluorescència indirecta és menys costosa a causa del fet que la conjugació d'anticossos secundaris és menys costosa i més fàcil. En comparació amb la immunofluorescència directa, la reactivitat creuada de les espècies és alta en el mètode indirecte.
Quines similituds hi ha entre la immunofluorescència directa i la indirecta?
- Són dos tipus de tècnica d'immunofluorescència.
- Els anticossos primaris i el fluoròfor participen en ambdós mètodes.
- A més, la reacció antigen-anticossos es produeix en ambdós mètodes.
- A més, tant la immunofluorescència directa com la indirecta utilitzen un microscopi de fluorescència per a la detecció d'antigen.
Quina diferència hi ha entre la immunofluorescència directa i la indirecta?
La immunofluorescència pot ser directa o indirecta en funció de la conjugació del fluoròfor amb els anticossos utilitzats. En la immunofluorescència directa, el fluoròfor es conjuga amb l'anticòs primari, que és l'únic anticòs que implica aquesta tècnica. En canvi, en la immunofluorescència indirecta, el fluoròfor es conjuga amb l'anticossos secundari, que és un dels dos tipus d'anticossos que intervenen en la tècnica. Per tant, la principal diferència entre la immunofluorescència directa i indirecta és el tipus d'anticossos que es conjuga amb el fluoròfor.
La infografia següent proporciona una comparació paral·lela de la diferència entre la immunofluorescència directa i la indirecta.
Resum: immunofluorescència directa i indirecta
La immunofluorescència és una tècnica que s'utilitza per detectar la presència d'antígens específics en una mostra. Aquesta tècnica utilitza anticossos específics. Per tant, en aquest, els anticossos es conjuguen amb fluoròfors per detectar-los mitjançant un microscopi fluorescent. A més, hi ha dos tipus d'immunofluorescència, la immunofluorescència directa i la indirecta. La immunofluorescència directa implica un únic anticòs i un fluoròfor directament conjugat a aquest anticòs. La immunofluorescència indirecta implica dos anticossos; primari i secundari i fluoròfor conjugat a l'anticòs secundari. Com que diversos anticossos secundaris es poden unir amb un anticòs primari i diversos fluoròfors es poden conjugar amb anticossos secundaris, la immunofluorescència indirecta és un mètode més sensible que el mètode directe. A més, el mètode indirecte és menys costós que el mètode directe. Per tant, aquesta és la diferència entre la immunofluorescència directa i indirecta.
