La diferència clau entre GFP i EGFP és que la GFP és una proteïna de tipus salvatge incorporada en la clonació molecular de cèl·lules no mamífers, mentre que l'EGFP és un tipus millorat o dissenyat de GFP que es pot utilitzar en cèl·lules de mamífers..
La clonació molecular és una tècnica avançada que els científics utilitzen enormement per expressar proteïnes mitjançant tecnologia recombinant. En la tecnologia de l'ADN recombinant, és necessari transformar el vector recombinant amb èxit a l'organisme hoste. Per tant, durant el procés de transformació, s'hauria d'identificar i confirmar si el gen d'interès s'ha transformat o no a l'hoste. Per avaluar-ho, els biòlegs moleculars adopten diverses tècniques. D'aquestes tècniques, una és el gen reporter. Aquests gens reporters actuen com a marcadors seleccionables per seleccionar els transformants correctes. Així, la proteïna fluorescent verda (GFP) i la proteïna fluorescent verda millorada (EGFP) són dues proteïnes informadores que s'utilitzen en la clonació molecular.
Què és GFP?
GFP és una proteïna de tipus salvatge que conté 238 residus d'aminoàcids i diverses regions seleccionables de seqüències d'aminoàcids que la distingeixen de les altres proteïnes fluorescents. A més, aquesta proteïna de tipus salvatge estava originàriament aïllada d'Aequorea Victoria; un tipus de medusa. Tanmateix, en els fenòmens naturals, la medusa era capaç de produir fluorescència de color verd en resposta a determinats estímuls.
Abans, aquest concepte va sorprendre els científics i van decidir utilitzar-lo en les seves tecnologies d'ADN recombinant. En conseqüència, els científics van utilitzar aquesta forma mutant del gen de tipus salvatge com a gen reporter en els seus estudis d'expressió gènica. El gen de tipus salvatge de GFP és capaç de produir una proteïna que dóna fluorescència a temperatura ambient o sota llum UV. Per tant, quan s'insereix als transformants, expressa i produeix fluorescència. Si la fluorescència resulta després del procés de transformació, confirma l'èxit del procés de transformació. En paraules senzilles, l'emissió de fluorescència indica l'èxit de la transformació del vector que porta el gen d'interès a l'hoste.
Figura 01: GFP
Per aquest motiu, la GFP actua com a marcador in vivo de l'expressió gènica. Actualment, s'utilitzen tècniques d'enginyeria genètica per produir GFP. A més, hi ha disponibles moltes versions millorades de GFP, com ara EGFP. Per tant, això permet un ús eficient de la GFP en estudis de clonació molecular i expressió gènica.
Què és l'EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein o EGFP és una versió millorada de GFP. En paraules senzilles, podem definir EGFP com una versió dissenyada de GFP de tipus salvatge. Quan el gen de tipus salvatge de GFP muta, produeix efectes beneficiosos. Per tant, el gen mutat de GFP permet l'expressió de nous caràcters i, com a resultat d'això, podem produir GFP millorada amb característiques millorades. A més, podem introduir mutacions amb èxit en el gen GFP de tipus salvatge mitjançant mètodes químics o d'irradiació. Aquests gens mutats produeixen llavors l'EGFP, que té característiques més beneficioses.
Figura 02: EGFP
Les característiques millorades de l'EGFP són les següents;
- Pot emetre senyals de fluorescència més forts.
- Té una alta sensibilitat.
- Pot utilitzar-lo en cèl·lules de mamífers en lloc de procariotes i altres eucariotes de nivell inferior.
- A més, proporciona una major puresa del producte.
Per tant, en comparació amb GFP, EGFP és l'opció preferida per als estudis d'expressió gènica. Tanmateix, el producte és més car en comparació amb GFP.
Quines similituds hi ha entre GFP i EGFP?
- GFP i EGFP són dues proteïnes que tenen la capacitat d'emetre color verd
- Per tant, ambdues funcionen com a proteïnes informadores en estudis d'expressió gènica.
- A més, és possible sintetitzar tots dos mitjançant la tecnologia d'ADN recombinant.
- A més, és fàcil mutar encara més aquests dos tipus per sintetitzar formes millorades.
Quina diferència hi ha entre GFP i EGFP?
El gen reporter és un gen que s'uneix al gen d'interès en la tecnologia d'ADN recombinant. Indica l'èxit de la transformació del vector recombinant a l'hoste. Aquí, GFP i EGFP són dos tipus de proteïnes fluorescents verdes que funcionen com a proteïnes reporters. Tanmateix, la diferència clau entre GFP i EGFP és que el GFP és de tipus salvatge mentre que EGFP és una versió dissenyada de GFP. A més, l'EGFP té característiques més beneficioses que la GFP. Per exemple, EGFP produeix una llum fluorescent més forta i és més sensible que la GFP. Una altra diferència entre GFP i EGFP són els sistemes en què podem utilitzar-los. Els sistemes no mamífers utilitzen GFP mentre que els sistemes de mamífers utilitzen EGFP.
La infografia següent presenta la diferència entre GFP i EGFP en forma de taula.
Resum: GFP vs EGFP
GFP i EGFP són proteïnes informadores en estudis de clonació molecular i expressió gènica. GFP és la proteïna de tipus salvatge, que és una proteïna fluorescent verda. La proteïna estava inicialment aïllada de la medusa Aequorea victoria. En canvi, EFGP és una forma millorada de proteïna GFP. És un mutant de tipus salvatge amb característiques millorades. Per tant, EFGP té la intensitat del senyal més alta i la sensibilitat més alta. Per tant, podem utilitzar-lo en vectors de mamífers. En canvi, l'ús de GFP només es fa en vectors no mamífers. En general, aquesta és la diferència entre GFP i EGFP.
