La diferència clau entre RP HPLC i HIC és que RP HPLC utilitza una fase mòbil més polar i una fase estacionària menys polar. Mentre que, HIC utilitza una fase estacionària hidròfoba que permet que les molècules hidròfobes s'hi uneixin.
La cromatografia és una tècnica analítica que ajuda a separar una mescla en els seus components. En primer lloc, hem de dissoldre la mostra per separar-la en una solució. Aquesta mescla solució-substància s'anomena fase mòbil. A continuació, la fase mòbil passa per un altre material anomenat fase estacionària. La fase estacionària determina la separació dels components. La separació es produeix a causa de la partició del material entre la fase mòbil i la fase estacionària.
Què és RP HPLC?
El terme RP HPLC significa cromatografia líquida d' alt rendiment en fase inversa. Implica la separació de components en una mescla, segons hidrofobicitat. Els components hidròfobs de la fase mòbil s'enllaçen amb els lligands hidròfobs immobilitzats a la fase estacionària, mentre que els components hidròfils elueixen a través de la fase estacionària sense unir-se a la superfície de la fase estacionària..
Figura 01: aparell HPLC
A més, aquest mètode té més reproductibilitat en comparació amb altres tècniques cromatogràfiques i també mostra una àmplia aplicabilitat. Per tant, utilitzem aquest mètode als laboratoris per a més del 75% de tots els mètodes HPLC. La majoria de les vegades, utilitzem una barreja aquosa d'aigua amb un dissolvent orgànic polar miscible com a fase mòbil. Així, s'assegurarà la fixació dels components hidrofòbics de la solució a la superfície de la fase estacionària.
Què és HIC?
El terme HIC significa cromatografia d'interacció hidrofòbica. És un tipus de HPLC de fase inversa, i aquest mètode s'utilitza principalment per a la separació de grans biomolècules com les proteïnes. En aquest mètode, hem d'utilitzar un medi aquós per fer la mostra de la biomolècula. És perquè els dissolvents orgànics poden provocar la desnaturalització de les proteïnes. A més, aquesta tècnica utilitza la interacció entre molècules grans amb una superfície lleugerament hidrofòbica de la fase estacionària. A més, hem d'utilitzar una alta concentració de sal a la mostra perquè afavoreix la retenció de la proteïna a l'embalatge; aquest procés s'anomena salaó. Disminuint gradualment la concentració de sal, podem fer que les biomolècules elueixin per separat segons la seva hidrofobicitat.
En general, aquest mètode utilitza les condicions oposades a les de la cromatografia d'intercanvi iònic. En aquesta tècnica, primer, hem de passar una solució tampó a través de la columna per tal de reduir la solvació del solut a la mostra. Fa que les regions hidrofòbiques de la proteïna s'exposin. Tanmateix, quan la molècula és més hidròfoba, es necessita menys sal per afavorir la unió. Aquí, primer s'elueixen els soluts menys hidrofòbics i, segons el canvi de concentració de sal, s'elueixen més soluts hidrofòbics en últim lloc.
Quina diferència hi ha entre RP HPLC i HIC?
La cromatografia és una tècnica analítica per a la separació de components en una mescla. RP HPLC i HIC són dues tècniques cromatogràfiques especialitzades. La diferència clau entre RP HPLC i HIC és que RP HPLC utilitza una fase mòbil més polar i una fase estacionària menys polar, mentre que HIC utilitza una fase estacionària hidròfoba, que permet que les molècules hidròfobes s'hi uneixin.
La infografia següent resumeix la diferència entre RP HPLC i HIC.
Resum – RP HPLC vs. HIC
La cromatografia és una tècnica analítica per a la separació de components en una mescla. RP HPLC i HIC són dues tècniques cromatogràfiques especialitzades. La diferència clau entre RP HPLC i HIC és que RP HPLC utilitza una fase mòbil més polar i una fase estacionària menys polar, mentre que HIC utilitza una fase estacionària hidrofòbica, que permet que les molècules hidròfobes s'hi uneixin.
