La diferència clau FPLC i HPLC és que FPLC és un tipus de cromatografia líquida que purifica grans biomolècules com proteïnes, nucleòtids i pèptids, mentre que l'HPLC és un tipus de cromatografia líquida que separa compostos de petit pes molecular.
La cromatografia líquida és una tècnica que s'utilitza per separar una mostra en els seus components individuals. Aquesta separació es produeix a causa de la interacció de mostres específiques amb fases mòbils i estacionàries. Els components d'una mostra es separen en funció de l'afinitat de cada component per la fase mòbil en cromatografia líquida. A mesura que la fase mòbil i la mostra passen per una columna, els components de la mostra comencen a separar-se en bandes que es poden detectar mitjançant espectroscòpia UV-VIS. Per tant, FPLC i HPLC són dos tipus de tècniques de cromatografia líquida.
Què és FPLC?
FPLC és un tipus de cromatografia líquida que purifica grans biomolècules com proteïnes, nucleòtids i pèptids. La cromatografia líquida de proteïnes ràpides (FPLC) va ser desenvolupada i comercialitzada per primera vegada a Suècia per l'empresa Pharmacia l'any 1982. Sovint s'utilitza per analitzar o purificar barreges de proteïnes. Això té lloc basant-se en el principi de les afinitats dels components de la mostra pel fluid en moviment (fase mòbil) i un material sòlid porós (fase estacionària). En FPLC, la fase mòbil és un amortidor i la fase estacionària és una resina composta de perles. Normalment consisteix en agarosa reticulada empaquetada en una columna cilíndrica de vidre o plàstic.
Figura 01: aparell FLPC (cromatografia líquida de proteïnes ràpides)
En la majoria de l'estratègia FLPC, s'utilitza resina d'intercanvi iònic. Per tant, la proteïna d'interès s'uneix a la resina mitjançant una interacció de càrrega. La tècnica FLPC també utilitza dos buffers: el buffer 1 (el buffer en funcionament) i el buffer 2 (el buffer d'elució). Inicialment, quan s'executa el tampó i la barreja de mostra a través de la columna, la proteïna d'interès de la barreja s'uneix a la resina mitjançant una interacció de càrrega. Però la proteïna d'interès es dissocia i torna a la solució en el tampó d'elució quan el tampó d'elució travessa la columna al final del procés. Posteriorment, la solució (eluent que conté proteïnes d'interès) passa per dos detectors, que mesuren la concentració de sal i la concentració de proteïnes. A mesura que s'elueix cada proteïna, apareix com un "pic" durant la detecció i es pot recollir per a un ús posterior.
Què és l'HPLC?
HPLC és un tipus de cromatografia líquida que separa compostos de petit pes molecular. El 1969, la primera HPLC va ser fabricada comercialment per Waters Corporation, EUA. En la cromatografia líquida d' alt rendiment (HPLC), una barreja de mostra (analit) en un dissolvent (fase mòbil) es bombeja a través d'una columna amb material d'embalatge cromatogràfic (fase estacionària) a alta pressió. La barreja de mostra és transportada per un corrent de gas portador en moviment d'heli o nitrogen.
Figura 02: HPLC (cromatografia líquida d' alt rendiment)
Els components de la barreja de mostra que tenen la menor interacció amb la fase estacionària o la major quantitat d'interacció amb la fase mòbil sortiran de la columna més ràpidament. D' altra banda, els components de la mescla de mostra que tinguin la major quantitat d'interacció amb la fase estacionària o la menor quantitat d'interacció amb la fase mòbil sortiran de la columna més lentament. Basant-se en el principi d'interacció anterior, els components de la barreja de mostra es poden separar. A més, el detector d'instruments identifica cada component de la barreja de mostra que surt de la columna. L'HPLC s'utilitza per inspeccionar mostres ambientals i biològiques per detectar la presència o absència de compostos coneguts, com ara fàrmacs, toxines o pesticides. S'utilitza en diferents indústries com ara la farmacèutica, la mediambiental, la forense i la química.
Quines similituds hi ha entre FPLC i HPLC?
- FPLC i HPLC són tipus de cromatografia líquida.
- Tots dos s'utilitzen per separar i identificar mostres biològiques.
- Tenen una fase mòbil líquida i una fase estacionària sòlida.
- Les dues tècniques utilitzen una columna per passar per la mostra.
- Aquestes tècniques utilitzen bombes, detectors, vàlvules i programari per a la separació i detecció de mostres.
Quina diferència hi ha entre FPLC i HPLC?
FPLC és un tipus de cromatografia líquida que s'utilitza per purificar biomolècules grans com proteïnes, nucleòtids i pèptids. L'HPLC és un tipus de cromatografia líquida que s'utilitza per separar compostos de petit pes molecular. Per tant, aquesta és la diferència clau entre FPLC i HPLC. A més, FPLC utilitza monitors de pH i conductivitat així com col·lectors de fraccions. En canvi, l'HPLC no utilitza monitors de pH i conductivitat ni col·lectors de fraccions.
La infografia següent mostra més diferències entre FPLC i HPLC en forma de taula.
Resum: FPLC vs HPLC
La cromatografia és una tècnica analítica de laboratori utilitzada per a la separació de components d'una mescla. Es divideix en diversos tipus, com ara cromatografia en columna, cromatografia de gasos, cromatografia líquida, cromatografia d'intercanvi iònic, etc. FPLC i HPLC són dos tipus de tècniques de cromatografia líquida. FPLC és un tipus de cromatografia líquida que s'utilitza per purificar grans biomolècules com proteïnes, nucleòtids i pèptids. D' altra banda, l'HPLC és un tipus de cromatografia líquida que s'utilitza per separar compostos de petit pes molecular. Per tant, aquest és el resum de quina és la diferència entre FPLC i HPLC.
