La diferència clau entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric és que el cromatofocus és un tipus de mètode de cromatografia en columna que utilitza resines d'intercanvi iònic, mentre que l'enfocament isoelèctric és un tipus de tècnica d'electroforesi que utilitza gels de gradient de pH immobilitzats.
L'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric són dues tècniques que separen les proteïnes segons els seus punts isoelèctrics. Tant l'enfocament cromatològic com l'enfocament isoelèctric tenen un gran poder de resolució. El cromatofocus és un mètode de cromatografia en columna d' alta resolució, mentre que l'enfocament isoelèctric és un mètode de separació electroforètica. A més, l'enfocament cromatològic no utilitza un camp elèctric mentre que l'enfocament isoelèctric necessita un camp elèctric.
Què és el cromatofocus?
Cromatofocus és un tipus de cromatografia d' alta elució que separa les proteïnes segons les diferències en el seu punt isoelèctric. Utilitza una columna de resina d'intercanvi iònic i un gradient de pH desenvolupat internament. A diferència de l'enfocament isoelèctric, l'enfocament cromatològic no implica un camp elèctric. El cromatofocus és una potent tècnica de purificació que pot resoldre molècules molt similars fins i tot només difereixen en 0,02 unitats de pH. Per tant, el cromatofoc és el més adequat com a pas final de polit quan es requereix una alta resolució per separar components molt similars.
En el chromatofocusing, la mostra s'aplica a la columna barrejant-la amb el tampó inicial. Les proteïnes que es troben a un pH per sobre del seu punt isoelèctric estan carregades negativament i romanen a prop de la part superior de la columna, mentre que altres proteïnes que es troben a un pH per sota del seu punt isoelèctric migren per la columna. La proteïna amb el punt isoelèctric més alt s'elueix primer mentre que la proteïna amb el punt isoelèctric més baix s'elueix l'última de la columna. Aquesta tècnica es veu afectada per diversos factors, com ara la precipitació de proteïnes i la linealitat del gradient de pH.
Què és l'enfocament isoelèctric?
L'enfocament isoelèctric és una tècnica que separa diferents molècules en funció del seu punt isoelèctric. També es coneix com a electrofocus. Aquesta tècnica s'utilitza sovint per a la separació de proteïnes en un gel. En l'enfocament isoelèctric, la mostra s'afegeix a gels de gradient de pH immobilitzat (IPG). El gel IPG és una matriu de gel d'acrilamida copolimeritzada amb un gradient de pH. Les proteïnes migren cap al càtode fins que troben la regió del pH dels seus punts isoelèctrics. Quan una proteïna arriba al pH que no té càrrega neta, la migració s'atura i dóna una banda estacionària. De la mateixa manera, cada proteïna dóna una banda en un punt del gradient de pH corresponent al seu punt isoelèctric.
Figura 01: Enfocament isoelèctric
L'enfocament isoelèctric és el primer pas de l'electroforesi en gel bidimensional. En aquesta tècnica, primer se separen les proteïnes segons els seus punts isoelèctrics mitjançant enfocament isoelèctric i després se separen pel seu pes molecular mitjançant SDS-PAGE.
Quines similituds hi ha entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric?
- L'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric són dos mètodes de gran resolució.
- Tots dos es basen en el punt isoelèctric de les proteïnes.
- Aquestes tècniques utilitzen un gradient de pH.
- Ambdós procediments són informatius per a la caracterització de variants d'hemoglobina humana.
- Poden resoldre molècules on els valors de pI difereixen tan sols en 0,02 unitats de pH.
Quina diferència hi ha entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric?
Chromatofocusing és una tècnica de cromatografia en columna d' alta resolució que separa les proteïnes segons el seu punt isoelèctric. En canvi, l'enfocament isoelèctric és una tècnica electroforètica que separa proteïnes segons el seu punt isoelèctric mitjançant l'aplicació d'un camp elèctric al llarg d'un gradient de pH format en un capil·lar. Per tant, aquesta és la diferència clau entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric.
Una altra diferència entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric és que l'enfocament cromatològic no implica un camp elèctric mentre que l'enfocament isoelèctric necessita un camp elèctric.
Resum: enfocament cromatològic i enfocament isoelèctric
L'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric són dues tècniques similars que tenen una gran capacitat de resolució de molècules, especialment de molècules molt similars. El cromatofocus és una tècnica de cromatografia en columna d' alta resolució, mentre que l'enfocament isoelèctric és un mètode d'electroforesi. L'enfocament cromatològic no implica un camp elèctric, a diferència de l'enfocament isoelèctric. Així, això resumeix la diferència entre l'enfocament cromatològic i l'enfocament isoelèctric.
