La diferència clau entre el test BCA i Bradford és que el test BCA requereix temps i menys precís, mentre que el test de Bradford és ràpid i precís.
L'assaig BCA i Bradford són dos mètodes d'assaig per determinar la concentració de proteïnes. Aquests dos assajos tenen diferents principis d'assaig i diferències en la seva precisió.
Què és l'assaig de BCA?
L'assaig BCA o l'assaig d'àcid bicinconínic és un assaig bioquímic útil per determinar la concentració total de proteïnes en una solució. Aquest mètode també rep el nom d'assaig de Smith en honor al seu inventor, Paul K. Smith. Aquest mètode analític mostra similituds amb l'assaig de proteïnes de Lowry, l'assaig de proteïnes Bradford o el reactiu biuret. Podem observar la concentració total de proteïnes en una mostra determinada mitjançant un canvi de color de la solució de la mostra, que passa de verd a morat. Aquest canvi de color es produeix en proporció al contingut de proteïnes. A continuació, podem utilitzar una tècnica colorimètrica per analitzar la intensitat del color i el contingut de proteïnes de la mostra.
Mètode BCA d'estimació de proteïnes
Quan es considera el mecanisme de l'assaig de BCA, la solució típica de BCA conté una solució altament alcalina amb un pH d'aproximadament 11,25, i els ingredients d'aquesta solució inclouen àcid bicinconínic, carbonat de sodi, bicarbonat de sodi, tartrat de sodi i sulfat de coure (II) pentahidrat. Aquest assaig depèn principalment de dues reaccions químiques: la reducció del coure (II) a coure (I) pels enllaços peptídics de la proteïna i la quelació de dues molècules d'àcid bicinconínic amb ió coure (I), donant lloc a un complex de color porpra que pot absorbeix la llum a una longitud d'ona de 562 nm. En la primera reacció, la quantitat de coure (II) reduïda per enllaços peptídics és proporcional a la quantitat de proteïna de la mostra.
Què és l'assaig de Bradford?
L'assaig Bradford és un mètode analític espectroscòpic útil per mesurar la concentració de proteïnes en una solució. Aquest mètode va ser desenvolupat per Marion M. Bradford l'any 1976 i és un mètode relativament ràpid i precís.
Reacció de color de proteïnes i reactiu de Bradford
Podem utilitzar aquest mètode per determinar la concentració de la quantitat de proteïna en una mostra. La reacció química que té lloc a la mostra durant aquest assaig depèn únicament de la composició d'aminoàcids de la proteïna de la mostra.
Mètode Bradford d'estimació de proteïnes
Quan es considera el mètode d'aquest assaig, es tracta d'un assaig de proteïnes colorimètrics que es basa en el canvi d'absorbància del colorant anomenat Coomassie Brilliant Blue G-250. Generalment, aquest colorant existeix en tres formes: forma aniònica (blava), forma neutra (verda) i forma catiònica (vermella). Per tant, en condicions àcides, el colorant canvia de color de vermell a blau. Això es deu a la unió de la proteïna amb el colorant. En canvi, si no hi ha proteïna per unir-se amb el colorant, el canvi de color no apareix, la solució adquireix un color vermell-marró. Aquest colorant és capaç de formar un complex fort i no covalent amb el grup carboxil de la proteïna mitjançant forces de Van der Waal i atraccions electrostàtiques.
Quina diferència hi ha entre l'assaig BCA i Bradford?
L'assaig BCA i Bradford són dos mètodes d'assaig per determinar la concentració de proteïnes. Aquests dos assajos tenen diferents principis d'assaig i diferències en la seva precisió. La diferència clau entre l'assaig de BCA i Bradford és que l'assaig de BCA requereix temps i menys precís, mentre que l'assaig de Bradford és ràpid i precís.
La infografia següent resumeix les diferències entre l'assaig BCA i Bradford en forma de taula.
Resum: BCA vs Bradford Assay
L'assaig BCA o l'assaig d'àcid bicinconínic és un assaig bioquímic útil per determinar la concentració total de proteïnes en una solució. L'assaig de Bradford és un mètode analític espectroscòpic útil per mesurar la concentració de proteïnes en una solució. La diferència clau entre el test BCA i Bradford és que el BCA requereix temps i menys precís, mentre que el test de Bradford és ràpid i precís.
