La diferència clau entre BL21 i DH5 Alpha és que BL21 és una cèl·lula d'E. coli competent genèticament deficient de proteasa utilitzada principalment per a l'expressió de proteïnes, mentre que DH5 Alpha és una cèl·lula d'E. coli competent genèticament modificada amb la mutació recA1 utilitzada principalment. per a la transformació de plasmidis.
E. coli és un dels famosos organismes escollits per a la producció de proteïnes recombinants. S'ha convertit en la plataforma d'expressió més popular al llarg dels anys. També s'utilitza com a fàbrica de cèl·lules. BL21 i DH5 Alpha són dues cèl·lules d'E. coli modificades genèticament que s'utilitzen actualment per a l'expressió de proteïnes i la transformació de plasmidis, respectivament.
Què és BL21?
BL21 és una cèl·lula competent d'E.coli modificada genèticament amb deficiència de proteasa que s'utilitza principalment per a l'expressió de proteïnes. E. coli BL21 és una cèl·lula bacteriana derivada de la soca B. Té defectes de proteasa Lon i proteasa de membrana externa ompT. S'utilitza habitualment per a l'expressió de proteïnes recombinants perquè normalment aporta estabilitat a les proteïnes expressades. BL21 és útil per a l'expressió de proteïnes amb DNA pCold I-IV i DNA pCold TF. Però aquesta cèl·lula competent d'E. coli no està pensada per a un sistema d'expressió de proteïnes que utilitzi el promotor T7 com el sistema pET. El motiu d'això és que BL21 no expressa l'ARN polimerasa T7. A més, no es recomana utilitzar-lo per a la construcció o preparació de plasmidi ja que no té mutació recA.
Figura 01: BL21
BL21 va ser descrit per primera vegada per Studier el 1986 després de diverses modificacions de la línia B. Les cèl·lules BL21 són deficients en la proteasa LON, que degrada moltes proteïnes estranyes. A més, f alta un altre gen que codifica per a la proteasa de la membrana externa (OmpT) la funció de la qual és degradar les proteïnes extracel·lulars. La manca d'aquestes proteïnes desencadena la producció exitosa de proteïnes estranyes a les cèl·lules BL21 d'E. coli. A més, la mutació hsdSB en aquestes cèl·lules evita la metilació de l'ADN estrany i la interrupció de les cèl·lules BL21.
Què és DH5 Alpha?
DH5 Alpha és una cèl·lula competent d'E. coli modificada genèticament amb mutació recA1 que s'utilitza principalment per a la transformació de plasmidis. Les cèl·lules DH5 Alpha E. coli són modificades genèticament pel biòleg nord-americà Douglas Hanahan per maximitzar l'eficiència de la transformació. La cèl·lula DH5 Alpha té tres mutacions diferents: recA1, endA1 i lacZΔM15. recA1 és una mutació puntual que substitueix la glicina 160 amb un residu d'àcid aspártic al polipèptid recA. Aquesta mutació inhabilita l'activitat de les recombinases i inactiva la recombinació homòloga. La mutació endA1 inactiva una endonucleasa intracel·lular que impedeix que degradi el plasmidi inserit.
Figura 02: DH5 Alpha
A més, la mutació lacZΔM15 permet el cribratge blau-blanc de les cèl·lules transformades. Aquestes cèl·lules són cèl·lules competents. Sovint s'utilitzen amb transformació de clorur de calci per inserir el plasmidi desitjat. Les investigacions recents van identificar que la cèl·lula DH5 Alpha amb el mètode Hanahan era la cèl·lula competent més eficient per a la transformació de plasmidis.
Quines similituds hi ha entre BL21 i DH5 Alpha?
- BL21 i DH5 Alpha són dos E.colimodificats genèticament
- Les dues són cèl·lules competents.
- Consisteixen en diferents mutacions.
- Tots dos no tenen hàbitat natural.
- S'utilitzen amb finalitats de laboratori, com ara estudis d'expressió i procediments de clonació.
Quina diferència hi ha entre BL21 i DH5 Alpha?
BL21 és una cèl·lula competent d'E. coli modificada genèticament amb deficiència de proteasa que s'utilitza principalment per a l'expressió de proteïnes. D' altra banda, DH5 Alpha és una cèl·lula competent d'E. coli modificada genèticament amb mutació recA1 utilitzada principalment per a la transformació de plasmidis. Per tant, aquesta és la diferència clau entre BL21 i DH5 Alpha. A més, la cèl·lula BL21 E. coli no té la mutació recA1, mentre que la cèl·lula DH5 Alpha E. coli sí la mutació recA1.
La següent infografia mostra les diferències entre BL21 i DH5 Alpha en forma de taula.
Resum: BL21 vs DH5 Alpha
Les soques no patògenes d'E. coli són desenvolupades genèticament per científics per a estudis d'expressió de laboratori i amb finalitats de clonació. BL21 i DH5 Alpha són dues cèl·lules d'E. coli modificades genèticament. BL21 s'utilitza principalment per a estudis d'expressió de proteïnes. D' altra banda, DH5 Alpha s'utilitza principalment per a la transformació de plasmidis. Per tant, aquest és el resum de la diferència entre BL21 i DH5 Alpha.
