Diferència clau: ELISA directe vs indirecte
Un immunoassaig enzimàtic (ELISA), també conegut com a immunoassaig enzimàtic, és una prova serològica que detecta anticossos a la sang. S'utilitza com a eina de diagnòstic per esbrinar si el pacient ha estat exposat a un determinat tipus de virus o a un altre agent infecciós (antigen) i si l'organisme ha produït anticossos contra la infecció. ELISA també pot identificar les infeccions passades i actuals. Per tant, ELISA s'utilitza sovint com a prova de selecció prèvia pels metges abans de l'anàlisi en profunditat de les mal alties. Aquesta prova es pot realitzar al laboratori prenent una mostra de sang del pacient. Hi ha dos tipus de test ELISA: ELISA directe i ELISA indirecte. La diferència clau entre ELISA directe i indirecte és que l'ELISA indirecte és més sensible i requereix l'addició d'un anticòs secundari, mentre que l'ELISA directe és menys sensible i només utilitza un anticòs primari..
Què és Direct ELISA?
ELISA és una prova de diagnòstic de mal alties que es realitza per identificar la presència d'antígens o anticossos concrets a la sang. Es fa com un assaig de placa. Utilitza anticossos enllaçats amb enzims fàcilment analitzables. La presència d'antígens a la mostra de sèrum s'uneix a anticossos específics vinculats amb enzims. En el pas final, s'afegeix un substrat específic per reaccionar amb l'enzim. L'enzim converteix el substrat en un producte de color o que produeix senyal. El canvi de color en el substrat químic revela la presència d'un anticòs particular a la mostra de sèrum. La prova ELISA directa utilitza només un anticòs primari vinculat a l'enzim. En unir-se a l'antigen, canvia ràpidament de color, indicant la presència de l'agent infecciós a la sang. Tanmateix, la intensitat dels senyals és més feble en ELISA directe, ja que els epítops es limiten a la unió dels antígens. Per tant, l'ELISA directe és menys sensible en comparació amb l'ELISA indirecte.
Figura 01: prova ELISA directa
Què és ELISA indirecte?
ELISA es pot realitzar mitjançant dos tipus d'anticossos, a saber; anticòs primari i anticossos secundaris. L'eina ELISA indirecta utilitza ambdós tipus d'anticossos per amplificar els senyals per a una millor detecció. La tècnica ELISA indirecta es realitza de la següent manera.
- Les plaques s'incuben amb antígens i es renten per bloquejar la unió inespecífica.
- A continuació, s'afegeixen anticossos primaris i es renten.
- S'afegeixen anticossos secundaris lligats a enzims i es renten.
- S'afegeix un substrat i es deixa reaccionar amb els enzims.
- Es detecten senyals i s'identifica la presència o absència de l'antigen específic a la mostra.
En la prova ELISA indirecta, diversos anticossos secundaris es poden unir a un sol anticòs primari. Els anticossos secundaris s'uneixen amb enzims fàcilment analitzats. Per tant, una unió pot fer un senyal fort a causa de més d'una interacció. Per tant, l'ELISA indirecte és més sensible que l'ELISA directe. Tanmateix, l'ELISA indirecte pot fer senyals inespecífics a causa de les reaccions creuades dels anticossos secundaris.
Figura 02: prova ELISA indirecta
Quina diferència hi ha entre ELISA directe i indirecte?
ELISA directe vs indirecte |
|
| ELISA directe és menys sensible en comparació amb l'ELISA indirecte. | ELISA indirecte és més sensible. |
| Temps trigat | |
| La prova ELISA directa és un procés ràpid. | ELISA indirecte requereix molt de temps. |
| Ús d'anticossos | |
| Només s'utilitza un tipus d'anticossos (anticossos primaris) en ELISA directe. | Els anticossos primaris i secundaris s'utilitzen per a ELISA indirecte. |
| Enllaç amb enzims | |
| Els anticossos primaris estan relacionats amb enzims. | Els anticossos secundaris estan relacionats amb enzims. |
| Reactivitat creuada dels segons anticossos | |
| ELISA directe elimina la reactivitat creuada dels segons anticossos. | ELISA indirecte es veu afectat per la reactivitat creuada dels segons anticossos. |
| senyals | |
| Els senyals són febles en comparació amb els ELISA indirectes. | Els senyals s'amplifiquen en ELISA indirecte. Per tant, és fàcil de detectar. |
Resum: ELISA directe vs indirecte
ELISA és una tècnica bioquímica utilitzada principalment en immunologia per detectar la presència d'un anticòs o un antigen en una mostra de sang d'un pacient. Es pot realitzar mitjançant dos processos coneguts com ELISA directe o indirecte. La prova d'ELISA directa utilitza només anticossos primaris per detectar l'antigen, mentre que l'ELISA indirecta utilitza anticossos tant primaris com secundaris. En ELISA directe, els anticossos primaris s'etiqueten mentre que en ELISA indirecte s'etiqueten els anticossos secundaris. Aquesta és la diferència entre ELISA directe i indirecte.
