Diferència clau: YAC vs M13 Phage Vector
La clonació d'ADN és un procés important que permet la propagació de fragments importants d'ADN dels organismes. Requereix la unió d'ADN específic amb ADN vectorial per crear ADN recombinant que es transforma en l'organisme hoste. Un vector és una molècula d'ADN que es comporta com a vehicle per transportar material genètic estrany a una altra cèl·lula o organisme. Hauria de ser capaç de replicar-se dins de l'organisme hoste i produir múltiples còpies d'ADN recombinant. Hi ha diferents tipus de vectors utilitzats en la clonació d'ADN. El cromosoma artificial de llevat (YAC) i el vector fag M13 són dos tipus entre ells. La diferència clau entre el vector del fag YAC i el M13 és que el YAC és un cromosoma artificial que es replica a les cèl·lules de llevat, mentre que el vector del fag M13 és un ADN circular d'una sola cadena del bacteriòfag M13 que es replica a les cèl·lules E Coli.
Què és un vector YAC?
YAC és un cromosoma construït artificialment que té la capacitat de transportar un gran segment d'ADN estrany i replicar-se dins de les cèl·lules del llevat. Té centròmers, telòmers i seqüències de replicació autònoma essencials per a la replicació i l'estabilitat. El YAC també hauria de portar un marcador o marcadors selectius i llocs de restricció per convertir-lo en un vector de clonació eficaç. Es poden inserir seqüències grans que van des de 1000 kb fins a 2000 kb a YAC i transferir-se al llevat.
Figura 01: Vector YAC
Què és el M13 Phage Vector?
El bacteriòfag M13 és un virus que infecta i es replica a E Coli. El genoma del bacteriòfag M13 és de mida petita, uns 6,7 kb. És un ADN monocatenari, circular i de sentit positiu. Aquest virus infecta específicament els bacteris E Coli a través de F pilus. Un cop entra el ssDNA al bacteri, sintetitza la seva cadena complementària i es converteix en dsDNA o la forma replicativa (RF) de M13. La RF pot comportar-se com un plasmidi dins de l'organisme hoste. El dsDNA es replica dins d'E Coli i produeix ssDNA que porta nous fags. Aquests nous fags s'alliberen contínuament de l'E coli sense matar la cèl·lula hoste. Tanmateix, la infecció frena el creixement d'E coli. El dsDNA es pot extreure de cèl·lules bacterianes i utilitzar-se com a vectors en la clonació d'ADN. Es coneixen com a vectors fags M13. Es poden manipular i utilitzar fàcilment de manera similar als vectors plasmidis.
La capacitat inherent d'infecció d'aquests fags M13 serveix com una bona qualificació per utilitzar-se com a vector en la clonació de gens. Quan es desenvolupa M13 en un vector, s'han d'incorporar diversos elements al seu genoma. Són, un gen per a la proteïna repressor lac (lac I), la regió proximal de l'operador del gen lac Z, un promotor lac i un lloc de clonació múltiple (polylinker). Quan s'utilitza l'ADNdc del M13 com a vectors, es pot tractar com un vector plasmidi. Tanmateix, l'ús de ssDNA M13 té avantatges en la seqüenciació d'ADN i la mutagènesi dirigida al lloc.
Atès que el vector de fags M13 té múltiples llocs de clonació a la regió lacZ, els vectors recombinats es poden identificar fàcilment mitjançant el cribratge de colònies blau/blanc a les plaques d'agar que contenen IPTG i X-Gal. Les plaques blaves produïdes a les plaques no contenen els fags recombinats. Per tant, els fags amb insercions es poden seleccionar per a la clonació.
Figura 02: bacteriòfag M13
Quina diferència hi ha entre YAC i M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC és un cromosoma modificat genèticament que té la capacitat de transportar un gran segment d'ADN estrany i replicar-se dins de les cèl·lules del llevat. | El vector fag M13 és un vector viral desenvolupat pel bacteriòfag M13 que s'utilitza per inserir ADN estrany a E Coli. |
| Propòsit | |
| Els YAC es van dissenyar per clonar grans fragments d'ADN genòmic en llevats. | Els vectors fags M13 s'utilitzen per inserir ADN estrany a E Coli. |
| Insereix longitud | |
| Els YAC poden contenir insercions genòmiques de mida megabase (1000 kb – 2000 kb). | La mida de les insercions és d'uns 1.500 bps. |
| Construcció | |
| L'ADN YAC és difícil de purificar intacte i requereix una alta concentració per generar un sistema vectorial YAC. | Es produeix mitjançant una cadena electrònica fotosintètica cíclica. |
| Estabilitat | |
| YAC és inestable. | Els M13 fags es poden extreure fàcilment. |
| Talla | |
| Els enzims són molècules més grans. | Els M13 fags són estables que YAC. |
Resum: YAC vs M13 Phage Vector
YAC és un sistema vectorial construït artificialment que utilitza una regió específica del cromosoma del llevat per inserir grans segments de material genètic a les cèl·lules del llevat. El vector fag M13 és un sistema vectorial derivat del bacteriòfag M 13 que utilitza E coli com a organisme hoste. Aquesta és la diferència principal entre YAC i M13 Phage Vector. Tots dos són igualment útils en la tecnologia d'ADN recombinant i en la clonació de gens.
