La diferència clau entre l'assaig colorimètric i fluoromètric és que l'assaig colorimètric determina la concentració de compostos de colors en una solució, mentre que l'assaig fluoromètric determina el mecanisme cinètic d'una solució.
Un assaig bioquímic és una tècnica que detecta o quantifica analíticament l'activitat d'una molècula o substància biològica. És un procés in vitro. L'assaig colorimètric i l'assaig fluoromètric són dos tipus d'assaigs bioquímics habituals que es realitzen als laboratoris. Múltiples tècniques com ELISA i western blotting també són assajos bioquímics complexos per a la quantificació de l'activitat metabòlica i la mesura del comportament funcional de biomolècules com proteïnes, enzims i altres molècules petites. Aquests tipus d'assajos s'utilitzen per identificar les interaccions proteïna-ADN, proteïna-ARN i proteïna-proteïna.
Què és un assaig colorimètric?
Un assaig colorimètric és una tècnica que determina la concentració de compostos de colors en una solució. En altres paraules, l'assaig colorimètric és una reacció que provoca un canvi de color a causa d'una reacció enzimàtica o química entre reactius i analits. Els assajos colorimètrics es practiquen en bioquímica per provar enzims, compostos específics, hormones, anticossos i altres analits. Utilitzen colorímetres o espectrofotòmetres. Els colorímetres són instruments que caracteritzen mostres de colors per tal de proporcionar una mesura objectiva de les característiques del color. Un espectrofotòmetre és un dispositiu que mesura la intensitat de la llum en funció del color o la longitud d'ona de la llum.
Figura 01: assaig colorimètric
Com funciona un assaig colorimètric?
En un assaig colorimètric, es prepara una placa amb un anticòs particular unit als pous. Després s'afegeix la mostra. Això pot permetre que la mostra s'uneixi a l'anticossos. A continuació, s'afegeix un anticòs de detecció i un substrat als pous per reaccionar amb la sonda de detecció. La solució d'aturada s'afegeix al final abans de la lectura. Un pou buit anomenat blanc es deixa sense la mostra. En l'assaig colorimètric, com més fosc és el color, més gran és la concentració d'analit. Normalment, només es necessita una longitud d'ona per fer la lectura. Però si hi ha una mesura de referència, s'utilitzen dues o més longituds d'ona.
Què és un assaig fluoromètric?
L'assaig fluoromètric és una tècnica que determina el mecanisme cinètic de les reaccions enzimàtiques. Un assaig fluoromètric té lloc amb la formació d'un producte fluorescent a partir d'un substrat no fluorescent o viceversa. Aquest assaig també fa ús de la transferència d'energia de ressonància de fluorescència (FRET) on, la reacció enzimàtica canvia la posició de dos fluoròfors al substrat, canviant així la intensitat de la fluorescència.
Figura 02: assaig fluoromètric
Els assajos fluoromètrics són generalment molt més sensibles que altres assajos. Les estimacions d'enzims diagnòstics en mostres de teixits, cèl·lules o líquids dels pacients augmenten a causa de la seva sensibilitat més alta.
Com funciona un assaig fluoromètric?
En un assaig fluoromètric, s'afegeix un substrat a la mostra de la placa i es pren la resposta de fluorescència mitjançant el lector de plaques. Aquí, cada cel·la es mesura per separat. Les plaques opaques s'utilitzen en assajos fluoromètrics. Això redueix la dispersió de la llum. Es necessiten dues longituds d'ona per a aquest tipus d'assaig. Una longitud d'ona és per detectar l'excitació i l' altra longitud d'ona és per a l'emissió.
Quines són les similituds entre l'assaig colorimètric i fluoromètric?
- L'assaig colorimètric i l'assaig fluoromètric són dos tipus d'assaigs bioquímics.
- Tots dos assajos es realitzen per a diagnòstics mèdics.
- Aquests assaigs impliquen una reacció enzimàtica.
- Ambdós assaigs impliquen un substrat i analits.
Quina diferència hi ha entre l'assaig colorimètric i fluoromètric?
Un assaig colorimètric és una tècnica que determina la concentració de compostos de colors en una solució, mentre que l'assaig fluoromètric és una tècnica que determina el mecanisme cinètic de les reaccions enzimàtiques. Per tant, aquesta és la diferència clau entre l'assaig colorimètric i fluoromètric. A més, els assaigs fluoromètrics són més sensibles que els assaigs colorimètrics; així, els assajos fluoromètrics tenen la capacitat de detectar més analits. Per tant, aquesta és una altra diferència important entre l'assaig colorimètric i fluoromètric. A més, els assajos fluoromètrics requereixen dues longituds d'ona, mentre que els assajos colorimètrics es realitzen amb una longitud d'ona.
La infografia següent mostra més diferències entre els assaigs colorimètrics i fluoromètrics.
Resum: assaig colorimètric i fluoromètric
Un assaig bioquímic és un procés analític utilitzat per determinar i quantificar reaccions metabòliques cel·lulars. L'assaig colorimètric i l'assaig fluoromètric són dos tipus d'assaigs bioquímics. L'assaig colorimètric és una reacció que provoca un canvi de color a causa d'una reacció enzimàtica o química entre reactius i analits, mentre que l'assaig fluoromètric és una tècnica que s'utilitza per determinar el mecanisme cinètic de les reaccions enzimàtiques. Tots dos assajos depenen d'una reacció enzimàtica que implica un substrat i un analit. Els assaigs fluoromètrics són més sensibles que els assaigs colorimètrics. El més important, els assajos fluoromètrics requereixen dues longituds d'ona, mentre que els assajos colorimètrics es poden dur a terme només amb una longitud d'ona. Així, això resumeix la diferència entre l'assaig colorimètric i fluoromètric.
