La diferència clau entre l'assaig del micronucli i el del cometa és que el test del micronucli és important per comprovar el dany cromosòmic com a conseqüència de l'exposició al mutàgen, mentre que el test del cometa és important per detectar danys primaris a l'ADN en cèl·lules individuals.
Els assajos de genotoxicitat ajuden a avaluar les possibilitats de mutacions i anomalies cromosòmiques. Les genotoxines inclouen substàncies químiques i radiacions. Els carcinògens, mutàgens i teratògens són les principals categories de genotoxines. Causen diversos danys com ara mutacions puntuals, delecions, trencaments de cadena simple i doble, aberracions cromosòmiques, formacions de micronuclis, reparació de l'ADN i interaccions del cicle cel·lular. Aquestes condicions poden provocar una gran varietat de mal alties, i els assajos de genotoxicitat eviten el dany potencial d'aquestes condicions. L'assaig de micronuclis i l'assaig de cometes són dues tècniques d'assaig de genotoxicitat.
Què és l'assaig de micronuclis?
L'assaig de micronucli és un assaig per avaluar el dany cromosòmic com a conseqüència de l'exposició a mutàgens. És important en el cribratge de substàncies químiques que causen la formació de fus i micronuclis. Un assaig de micronucli proporciona informació sobre l'estabilitat de les substàncies químiques quan interfereixen amb l'estructura i la funció del cromosoma. Molts carcinògens donen positiu en assajos de micronuclis. El procés d'assaig implica un tractament químic i la mesura de la freqüència de les cèl·lules micronucleades. Si hi ha un augment anormal del nombre de cèl·lules de micronuclis, es conclou que la substància química indueix danys cromosòmics.
Se sol realitzar un assaig de micronuclis en cèl·lules que es divideixen activament. Per tant, els eritròcits i les cèl·lules mare de medul·la òssia produïdes mitjançant divisions cel·lulars són candidats ideals per a aquests assajos. Experimenten una rotació constant i ràpida. Com que els eritròcits no tenen nuclis reals, fa que les cèl·lules micronucleades siguin més visibles al final de l'assaig.
Figura 01: Observació d'assaig de micronuclis
Els assajos de micronucli són econòmics, més ràpids, còmodes i requereixen menys habilitats per dur-los a terme. Reflecteixen les aberracions cromosòmiques ràpidament d'una manera fiable i són extremadament útils per avaluar els danys cromosòmics ràpidament. Un tipus especial i versàtil d'assaig de micronuclis és l'assaig del citoma de micronucli de bloc de citocinesi (CBMNcyt). És l'assaig preferible per mesurar el dany cromosòmic i la inestabilitat a les cèl·lules. Tanmateix, el principal problema d'utilitzar l'assaig de micronuclis és que no és capaç de determinar diferents tipus d'aberracions cromosòmiques, i l'assaig té una influència en la taxa mitòtica i la proporció de mort cel·lular, fent que els resultats canviïn.
Què és l'assaig de cometes?
L'assaig de cometa, que també es coneix com a assaig d'electroforesi en gel únic, és una tècnica senzilla i sensible per detectar danys a l'ADN. Mesura les ruptures d'ADN a les cèl·lules eucariotes i és una tècnica estàndard per a la biovigilància i les proves de genotoxicitat.
L'assaig del cometa està implicat en l'encapsulació de cèl·lules en suspensions d'agarosa de baix punt de fusió, lisi de cèl·lules en condicions neutres o alcalines i electroforesi de cèl·lules lisades en suspensió. Durant el procés d'encapsulació, les cèl·lules queden suspeses en agarosa fosa de baix punt de fusió, i l'agarosa forma una matriu de fibres de carbohidrats per ancorar-les al seu lloc. L'agarosa és osmòticament neutra; per tant, permet que les solucions penetrin a través del gel i afectin les cèl·lules sense pertorbar-les ni desplaçar-les. La solució de lisi és una solució salina aquosa altament concentrada i un detergent. Aquesta sal altera les proteïnes i els patrons d'enllaç dins de la cèl·lula alhora que altera el contingut d'ARN de la cèl·lula. Les cèl·lules es destrueixen i totes les proteïnes, l'ARN, els constituents citoplasmàtics i nucleoplàsmics, es difonen i es difonen a la matriu d'agarosa, deixant l'ADN.
Figura 02: assaig de cometes
La solució d'electroforesi és una solució alcalina on la doble hèlix d'ADN es desnaturalitza i el nucleoide es converteix en monocatenari. Durant aquest procés, s'aplica un camp elèctric per analitzar les imatges. L'anàlisi de la imatge mesura la intensitat global de la fluorescència per a l'ADN i el nucleoide i compara els dos. L'estructura global s'assembla a un cometa amb un cap circular corresponent a l'ADN no danyat restant i una cua per a l'ADN danyat. Com més brillant i llarga sigui la cua a causa dels senyals més forts, més alt serà el nivell de dany.
Quines similituds hi ha entre l'assaig de micronuclis i cometes?
- El micronucli i l'assaig del cometa són econòmics, més ràpids, còmodes i requereixen menys habilitats.
- Es realitzen principalment amb ADN.
- Ambdós assaigs ajuden a avaluar mutacions i anomalies cromosòmiques.
- A més, ambdues tècniques utilitzen productes químics per dur a terme el procediment.
Quina diferència hi ha entre l'assaig de micronuclis i cometes?
L'assaig del micronucli és important per comprovar el dany cromosòmic com a conseqüència de l'exposició al mutàgen, mentre que l'assaig de cometes és important per detectar danys primaris a l'ADN en cèl·lules individuals. Per tant, aquesta és la diferència clau entre l'assaig de micronucli i cometa. A més, l'assaig de micronuclis està ben establert per detectar clastogenicitat i aneugenicitat. L'assaig del cometa s'utilitza com a prova de genotoxicitat per detectar danys primaris a l'ADN a les cèl·lules. A més, un assaig de micronucli proporciona informació sobre l'estabilitat dels productes químics, mentre que un assaig de cometa és una electroforesi en gel d'una sola cèl·lula.
La infografia següent presenta les diferències entre l'assaig de micronuclis i cometes en forma de taula per comparar-les.
Resum: assaig de micronucli i cometa
Els assajos de genotoxicitat ajuden a avaluar les possibilitats de mutacions i anomalies cromosòmiques. L'assaig de micronuclis i l'assaig de cometes són dues tècniques sota assajos de genotoxicitat. L'assaig del micronucli avalua el dany cromosòmic com a conseqüència de l'exposició a mutàgens. L'assaig de cometes és una tècnica senzilla i sensible per detectar danys a l'ADN. Per tant, aquesta és la diferència clau entre l'assaig de micronucli i cometa. L'assaig de micronuclis és important en el cribratge de substàncies químiques que causen la formació de fus i micronuclis. L'assaig de cometes està implicat en l'encapsulació de cèl·lules en suspensions d'agarosa de baix punt de fusió, la lisi de cèl·lules en condicions neutres o alcalines i l'electroforesi de cèl·lules lisades en suspensió.
