La diferència clau entre el llevat un híbrid i el llevat dos híbrids és que el llevat un híbrid és un assaig basat en in vitro per analitzar les interaccions ADN-proteïna, mentre que el llevat híbrid dos és un assaig basat en in vitro per analitzar les interaccions proteïna-proteïna.
Estudiar les interaccions entre molècules cel·lulars pot ajudar a definir els llocs de reconeixement implicats en l'expressió gènica i les vies de proteïnes. Les interaccions d'ADN i proteïnes són integrals als processos cel·lulars com ara les modificacions de l'ADN i la regulació transcripcional, etc. D' altra banda, les interaccions de proteïnes i proteïnes tenen un paper vital en processos cel·lulars com la replicació, transcripció, traducció i transducció de senyals. Per tant, és molt important identificar aquestes interaccions de molècules cel·lulars mitjançant diferents assajos. El llevat un híbrid i el llevat dos híbrids són dos assajos basats en vitro per analitzar les interaccions ADN-proteïna i proteïna-proteïna.
Què és Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) és un assaig basat en vitro per analitzar les interaccions ADN-proteïna intracel·lular. Aquest mètode va ser establert per primera vegada per Wang i Reed l'any 1993. Des d'aleshores, ha demostrat un major poder en la investigació biològica. En aquest assaig, hi ha dos components principals: l'esquer d'ADN i les preses proteiques.
Figura 01: Un híbrid de llevat
En el procediment, primer es clona una seqüència d'ADN (esquer d'ADN) aigües amunt de dos reporters diferents (HIS3, LacZ). Aquestes construccions reporters s'integren al genoma d'una soca de llevat. Els factors transcripcionals es prenen com a preses proteiques. Els factors transcripcionals es fusionen amb el domini d'activació transcripcional (AD) del factor transcripcional Gal4 del llevat per tal de fer proteïnes híbrides. Tota aquesta proteïna híbrida s'integra en un plasmidi abans d'introduir-la a la soca de llevat. Després de la introducció del plasmidi recombinant, quan el factor transcripcional interacciona amb el fragment d'ADN, el fragment AD activa l'expressió del gen reporter (HIS3 o LacZ). La seqüenciació dels plasmidis permet identificar el factor transcripcional que es pot unir al fragment d'ADN. Recentment, es va utilitzar un mètode híbrid de llevat per investigar el diagnòstic de mal alties. Per tant, en el futur, aquest assaig s'utilitzarà més àmpliament en la investigació científica i els tractaments mèdics.
Què és el llevat híbrid dos?
Yeast two hybrid (Y2H) és un assaig basat en vitro per analitzar les interaccions de proteïnes i proteïnes intracel·lulars. Aquest mètode va ser trobat originalment per Stanley Fields i Ok-Kyu Song l'any 1989. Aquesta tècnica detecta les interaccions proteïna-proteïna mitjançant el factor de transcripció Gal4 del llevat.
Figura 02: híbrid de llevat dos
En aquest mètode, primer es construeixen dues fusions (híbrids) utilitzant proteïnes d'interès: fusionant una proteïna amb el domini d'unió a l'ADN (DBD) i fusionant l' altra proteïna amb el domini activador (AD) del factor de transcripció Gal4.. La proteïna fusionada amb DBD es coneix com a esquer, mentre que la proteïna fusionada amb AD es coneix com a presa. A la soca de llevat, després de la interacció de l'esquer i la presa, el DBD i l'AD es posen molt a prop per generar un factor de transcripció funcional Gal4 aigües amunt del gen reporter. El factor de transcripció funcional activa l'expressió del gen reporter. A més, aquest mètode s'utilitza actualment per examinar les interaccions de proteïnes integrals de membrana en cèl·lules de mamífers.
Quines similituds hi ha entre el llevat 1 híbrid i el llevat 2 híbrid?
- Híbrid de llevat un i híbrid de llevat dos són dos assajos basats en vitro per analitzar les interaccions proteïna-ADN i proteïna-proteïna.
- Aquests assaigs utilitzen soques de llevat.
- Ambdós assaigs utilitzen el domini d'activació (AD) del factor de transcripció Gal4.
- Utilitzen l'expressió del gen reporter (HIS3 o LacZ) per detectar interaccions.
- Tenen esquer i preses.
- Ambdós assaigs són molt útils en la investigació biològica moderna.
Quina diferència hi ha entre el llevat 1 híbrid i el llevat 2 híbrid?
Yeast one hybrid és un assaig basat en in vitro per analitzar les interaccions d'ADN i proteïnes, mentre que l'híbrid de llevat dos és un assaig basat in vitro per analitzar les interaccions de proteïnes i proteïnes. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el llevat un híbrid i el llevat dos híbrids. A més, en el llevat un híbrid, l'esquer és un fragment d'ADN i la presa és una molècula de proteïna. D' altra banda, en el llevat dos híbrids, tant l'esquer com la presa són molècules de proteïnes.
La infografia següent mostra les diferències entre el llevat un híbrid i el llevat dos híbrids en forma de taula per comparar-les.
Resum: híbrid de llevat 1 vs híbrid de llevat dos
Llevat un híbrid i llevat dos híbrids són dos assajos importants basats en vitro. L'híbrid de llevat és un assaig basat en in vitro per analitzar les interaccions d'ADN i proteïnes, mentre que l'híbrid de llevat dos és un assaig basat en vitro per analitzar les interaccions de proteïnes i proteïnes. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el llevat un híbrid i el llevat dos híbrids.
