Diferència clau: ADN ligasa T4 vs T7
ADN lligasa és un enzim important utilitzat en tècniques de biologia molecular. Funciona com una cola molecular per unir nucleòtids formant enllaços fosfodièster entre nucleòtids. Els enllaços fosfodièster es formen entre l'extrem hidroxil 3' del fragment de sucre i el grup fosfat de l'extrem 5'. L'ADN lligasa és vital en el procés de replicació per unir els fragments d'Okazaki de la cadena retardada i durant els mecanismes de reparació de l'ADN i els experiments de clonació in vitro per unir el gen d'interès desitjat al genoma del vector. Actualment hi ha dues lligases d'ADN principals utilitzades pels biòlegs moleculars: les lligases d'ADN T4 i T7. L'ADN lligasa T4 és un dels primers enzims a aïllar-se del bacteriòfag T4. L'ADN lligasa T7, que és una proteïna més petita, és un enzim aïllat del bacteriòfag T7. Aquesta és la diferència clau entre les lligases d'ADN T4 i T7.
Quina és l'acció de l'ADN ligasa?
La lligadura de l'ADN es produeix en una reacció de tres passos. El primer pas és un atac nucleòfil a l'alfa-fòsfor de l'ATP generant un intermedi enzim-adenilat covalent en el qual l'AMP s'enllaça al nitrogen de la cadena lateral terminal de la lisina. En el segon pas, es produeix un atac nucleòfil al fòsfor de l'enzim-adenilat pel substrat d'ADN terminat en 5'-fosfat, alliberant lisina i formant ADN-adenilat. En el pas final, l'ADN-adenilat és atacat per 3'-OH d'una altra cadena d'ADN, alliberant AMP i unint-se als polinucleòtids.
Què és l'ADN ligasa T4?
T4 Ligasa va ser la primera lligasa aïllada i identificada per Meselson, Weigle i Kellenberger i va ser la primera lligasa comercial produïda. L'ADN lligasa T4 és un enzim dependent de l'ATP que catalitza la formació d'enllaços fosfodièster. És una cadena polipeptídica única amb 487 residus d'aminoàcids i té un pes molecular d'uns 77 kDa. El pH òptim per a la seva activitat es troba entre 7,5 i 8.
Figura 01: ADN lligasa T4
L'ADN lligasa T4, com el seu nom indica, està present al bacteriòfag T4 i es va aïllar quan el fag va produir l'enzim després de la infecció per E. coli. L'enzim lliga dúplex d'ADN de doble cadena amb extrems roms i els fragments que s'han d'unir han d'estar molt a prop els uns dels altres.
Què és l'ADN ligasa T7?
T7 lligasa és una proteïna de 41 kDa produïda pel bacteriòfag T7 i s'aïlla infectant cèl·lules d'E. coli. La funció principal de la lligasa T7 és lligar els dúplex d'ADN mitjançant enllaços fosfodièster i unir fragments propers d'ADN durant els experiments de clonació. El pH òptim per a l'ADN lligasa T7 es troba entre 7,0 i 7,2. La lligasa T7 depèn de l'ATP. Les lligases d'ADN T7 també són capaces de recuit híbrids d'ADN i ARN, donant lloc a conformacions anormals durant la transcripció; tanmateix, aquest fenomen encara s'està investigant mitjançant estudis in vitro.
Quines similituds hi ha entre l'ADN lligasa T4 i la T7?
- T4 i T7 ADN ligasa participen en una reacció de lligadura recuit dúplex d'ADN mitjançant la formació d'enllaços fosfodièster entre l'extrem OH 3' i l'extrem fosfat 5' del fragment d'ADN.
- Els dos enzims lliguen els dúplex d'ADN d'extrem rom que estan molt a prop l'un de l' altre.
- Ambdós enzims depenen de l'ATP.
- Aquests enzims s'aïllen infectant cèl·lules d'E. coli amb el bacteriòfag concret.
- Les aplicacions d'ambdós enzims inclouen:
- Clonació molecular: per lligar el gen d'interès al vector
- Reparació d'ADN: per reparar nínxols de doble cadena
- Replicació d'ADN in vitro
- Reacció en cadena de lligasa
Quina diferència hi ha entre l'ADN ligasa T4 i T7?
T4 vs T7 ADN ligasa |
|
| T4 DNA ligasa tipus d'ADN lligasa aïllada del bacteriòfag T4 i està implicada en lligar fragments d'ADN adjacents mitjançant la formació d'enllaços fosfodièster. | T7 ADN ligasa tipus d'ADN lligasa aïllada del bacteriòfag T7 i està implicada en lligar fragments d'ADN adjacents mitjançant la formació d'enllaços fosfodièster. |
| Mida de la proteïna | |
| La mida de l'ADN lligasa T4 és de 77 kDa, més gran en comparació amb l'ADN lligasa T7. | La mida de l'ADN lligasa T7 és de 41 kDa. |
| pH òptim | |
| El rangde pH que funciona l'ADN lligasa T4 és de 7,5 a 8,0. | L'interval de pH que funciona amb l'ADN lligasa T7 és de 7,0 a 7,2. |
Resum: ADN lligasa T4 vs T7
ADN lligases són una classe important d'enzims implicats en la clonació molecular per produir molècules d'ADN recombinant que contenen el gen d'interès. La reacció de lligament és una reacció que utilitza energia i hi ha nous estudis de recerca en curs per millorar la precisió mitjançant la modulació de les lligases disponibles. Les DNA lligases T4 i T7 són dos tipus d'enzims importants d'ADN lligases utilitzats en tècniques de biologia molecular. L'ADN lligasa T7 també és el resultat d'una investigació que es va basar en la lligasa primària aïllada d'E. coli infectada amb T4. T7 es mostra amb més eficàcia i precisió per dur a terme la seva funció a causa de la seva mida més petita. Aquesta és la diferència entre la lligasa T4 i la T7.
Descarregueu la versió PDF de l'ADN ligasa T4 vs T7
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons les notes de citació. Si us plau, descarregueu la versió PDF aquí Diferència entre T4 i T7 Ligase.
