Diferència clau: electroforesi de gel horitzontal i vertical
L'electroforesi en gel és una tècnica de laboratori utilitzada en genètica per separar mescles que contenen ADN, ARN i altres proteïnes segons la seva càrrega i mida molecular respectives. L'ADN, l'ARN o les proteïnes que s'han de separar en aquest mètode es passen a través d'un gel que conté porus petits. Les molècules són conduïdes a través del gel per un camp elèctric. Les molècules travessen els porus del gel i la velocitat del moviment és inversament proporcional a les seves longituds respectives. Per tant, les molècules amb una mida molecular més baixa es mouran més ràpidament que les molècules amb un pes molecular més elevat. El camp elèctric es genera per la diferència de càrrega als dos extrems del gel. Un extrem conté una càrrega positiva i l' altre extrem conté una càrrega negativa. Com que les molècules d'ADN i ARN estan carregades negativament, seran atretes cap a l'extrem carregat positivament del gel. L'electroforesi en gel pot ser de dos mètodes diferents: electroforesi en gel horitzontal i electroforesi en gel vertical. En l'electroforesi de gel horitzontal, el gel està present en una orientació horitzontal i està submergit en un tampó de funcionament continu que està present dins de la pròpia caixa de gel. En l'electroforesi vertical en gel, el sistema tampó s'orienta verticalment i és discontínu amb dues cambres presents a la part superior i inferior amb un càtode i un ànode, respectivament. Aquesta és la diferència clau entre l'electroforesi en gel horitzontal i vertical.
Què és l'electroforesi en gel horitzontal?
L'electroforesi en gel horitzontal utilitza la teoria bàsica per a la separació de molècules d'ADN, ARN o proteïnes segons la seva mida i càrrega molecular respectives. En aquesta tècnica, el gel està present en una orientació horitzontal i està submergit en un tampó que és continu. El gel d'agarosa s'utilitza per separar la caixa de gel en dos compartiments. Un extrem de la caixa de gel conté un ànode mentre que l' altre extrem conté un càtode. Quan s'aplica un corrent, el buffer utilitzat en aquesta tècnica permet la creació d'un gradient de càrrega. Quan s'aplica la càrrega, el gel tendeix a escalfar-se. El tampó també funciona com a refrigerant, que manté la temperatura a nivells òptims. La recirculació del tampó en funcionament evita la formació d'un gradient de pH. No es pot utilitzar un sistema tampó discontinu en l'electroforesi de gel horitzontal, ja que els dos compartiments del sistema de gel es connecten amb el tampó en funcionament. L'acrilamida s'utilitza durant l'electroforesi en gel per separar les mescles de proteïnes.
Figura 01: electroforesi de gel horitzontal
En l'electroforesi de gel horitzontal, l'acrilamida no es pot utilitzar ja que la caixa de gel està exposada a l'oxigen. A causa de la presència d'oxigen, la polimerització de l'acrilamida s'inhibeix, i això interfereix amb la formació del gel. L'electroforesi en gel horitzontal és un mètode sense esforç que s'utilitza en la separació d'ADN i ARN.
Què és l'electroforesi en gel vertical?
La tècnica d'electroforesi en gel vertical funciona segons la teoria primària de l'electroforesi en gel, però es considera que és més complexa que el mètode d'electroforesi en gel horitzontal. Aquesta tècnica utilitza un buffer discontinu. Un càtode es troba a la cambra superior i l'ànode es troba a la cambra inferior. Els elèctrodes presents a cada compartiment proporcionen el camp elèctric requerit. S'aboca una fina capa de gel entre les dues plaques de vidre muntades. Per tant, la part superior del gel està submergida a la cambra superior i la part inferior del gel es submergeix a la cambra de la part inferior. Un cop aplicat el corrent, una petita part del tampó es mou a la cambra inferior des de la cambra superior a través del gel. El corrent aplicat en aquesta tècnica és d'unitats de minuts.
Figura 02: electroforesi vertical en gel
A l'electroforesi vertical en gel, el tampó només flueix a través del gel. Això permet un control precís del gradient de tensió durant l'etapa de separació. Es pot utilitzar gel d'acrilamida ja que els compartiments no estan exposats a l'oxigen atmosfèric. A causa de la mida de porus més petita del gel d'acrilamida, es pot aconseguir una separació precisa amb una resolució més alta.
Quines similituds hi ha entre l'electroforesi en gel horitzontal i vertical?
- Ambdós sistemes funcionen segons la teoria bàsica de l'electroforesi en gel.
- L'ànode i el càtode s'utilitzen per proporcionar el camp elèctric necessari en ambdós sistemes.
Quina diferència hi ha entre l'electroforesi de gel horitzontal i vertical?
Electroforesi en gel horitzontal vs vertical |
|
| L'electroforesi en gel horitzontal és una tècnica d'electroforesi en gel en què el gel està present en una orientació horitzontal. | L'electroforesi vertical en gel és una tècnica d'electroforesi en gel en què el gel s'orienta verticalment. |
| Buffer | |
| L'electroforesi en gel horitzontal consta d'un buffer continu. | El buffer de funcionament és discontinu en l'electroforesi de gel vertical. |
| Ús d'acrilamida | |
| L'acrilamida no es pot utilitzar per a l'electroforesi en gel horitzontal, ja que la caixa de gel està exposada a l'oxigen atmosfèric. | Com que el gel no està exposat a l'oxigen atmosfèric a causa de dues cambres separades, l'acrilamida es podria utilitzar per a l'electroforesi vertical en gel. |
| Funció | |
| L'electroforesi en gel horitzontal s'utilitza més sovint per a la separació de mescles d'ADN i ARN, però no proteïnes. | L'electroforesi vertical en gel s'utilitza per separar mescles de proteïnes. |
Resum: electroforesi en gel horitzontal i vertical
L'electroforesi en gel és una tècnica de laboratori que s'utilitza àmpliament en la separació de mescles que contenen molècules d'ADN, ARN i proteïnes. Hi ha dos mètodes d'electroforesi en gel: electroforesi en gel horitzontal i vertical. En l'electroforesi de gel horitzontal, el tampó de funcionament és continu, mentre que en l'electroforesi de gel vertical és discontínua. Aquesta és la diferència entre l'electroforesi en gel horitzontal i vertical. Tots dos sistemes funcionen segons el principi comú de l'electroforesi en gel.
Baixa la versió PDF de l'electroforesi en gel horitzontal i vertical
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons la nota de citació. Baixeu la versió PDF aquí Diferència entre l'electroforesi de gel horitzontal i vertical.
