La diferència clau entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables és que el recompte total de cèl·lules estima totes les cèl·lules, incloses les cèl·lules microbianes vives i mortes d'una mostra, mentre que el recompte de cèl·lules viables només estima les cèl·lules microbianes vives d'una mostra.
Comptar el nombre d'organismes d'una població es considera necessari per a la majoria de treballs experimentals. Per tant, intentem analitzar el nombre de microbis dins d'una mostra mitjançant mètodes directes i indirectes. Les mesures directes impliquen mètodes que compten directament el nombre de cèl·lules. Les mesures indirectes impliquen mesurar algun paràmetre que pot estar relacionat amb el nombre de cèl·lules, com ara la densitat cel·lular, el pes sec, etc. Alguns mètodes quantifiquen només les cèl·lules microbianes vives d'una mostra. El recompte de cèl·lules viables és un d'aquests mètodes. Els recomptes microscòpics directes quantifiquen totes les cèl·lules d'un volum conegut de medi/mostra mitjançant un microscopi. Per tant, compta tant les cèl·lules vives com les mortes. És un tipus de recompte total de cel·les.
Què és el recompte total de cèl·lules?
El recompte total de cèl·lules és el mètode que consisteix a comptar totes les cèl·lules d'un volum conegut de medi/mostra mitjançant un microscopi i una cambra de recompte (hemocitòmetre). A diferència dels recomptes viables, es compten tant les cèl·lules vives com les mortes. Per tant, aquest és un recompte total tret que s'apliqui una taca de viabilitat durant l'observació. En microscòpia, les cèl·lules s'observen directament al microscopi i es compten. Utilitza una suspensió cel·lular que consta de cèl·lules microbianes. Per facilitar el recompte i les mesures precises, es pot fer la dilució de la mostra. En concentracions molt altes/basses de cèl·lules, obtenir el recompte total de cèl·lules mitjançant un microscopi és una tasca difícil.
Figura 01: Cambra de recompte – Hemocitòmetre
Les cambres de recompte són fàcils, barates i ràpides per fer un recompte total de cèl·lules. El més important és que les cambres de recompte són útils per comptar tant eucariotes com procariotes. Comptem cel·les en quadrats seleccionats de volum conegut per quantificar el recompte total de cel·les.
Què és el recompte de cèl·lules viables?
El recompte de cèl·lules viables és un mètode per comptar cèl·lules microbianes vives en una mostra. Només compta les cèl·lules vives de la mostra. El recompte de plaques viables, la filtració de membrana i el nombre més probable són poques tècniques de recompte de cèl·lules viables. Aquests enfocaments es basen en el creixement. El mètode de recompte de plaques viables és un mètode potent que s'utilitza en molts camps microbiològics, inclosa la microbiologia dels aliments i els lactis, la microbiologia mèdica, la microbiologia ambiental, la genètica microbiana, el desenvolupament de mitjans de creixement i la biotecnologia.
La manera més habitual de comptar els bacteris viables és utilitzar una mostra capaç de formar colònies en un medi d'agar. Hi ha dues maneres principals de realitzar un recompte de plaques: la tècnica de la placa estesa i la tècnica de la placa abocada. Un volum conegut de mostra es pot estendre a la superfície d'una placa d'agar o barrejar-se a l'agar. A continuació, s'incuba la placa i es compten les colònies sorgides. El nombre de colònies està relacionat amb el nombre de microorganismes dins de la mostra original. Els recomptes viables només mesuren les cèl·lules que estan vives i creixen.
Figura 02: Recompte de plaques viables
El nombre més probable (MPN) és una alternativa als mètodes de recompte de plaques per estimar la densitat de població de cèl·lules viables. Compta els organismes que creixen en cultiu líquid i, per tant, és una tècnica predominantment bacteriològica. És especialment útil per a baixes concentracions d'organismes, p. llet, aigua potable.
La tècnica de filtració de membrana és més adequada quan els microbis estan molt diluïts com en el subministrament d'aigua d'una ciutat. Es fa simplement passant un volum conegut del líquid per un filtre i incubant-lo en un medi nutritiu. Es compten les colònies que es desenvolupen al filtre i es calculen els bacteris per mil·lilitre de mostra.
Quines similituds hi ha entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables?
- El recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables són dos tipus de tècniques microbianes que quantifiquen les cèl·lules.
- Són tècniques d'enumeració que s'utilitzen habitualment als laboratoris de microbiologia.
Quina diferència hi ha entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables?
El recompte total de cèl·lules enumera totes les cèl·lules microbianes vives i mortes d'una mostra. En canvi, el recompte de cèl·lules viables només enumera les cèl·lules vives d'una mostra. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables. El recompte total de cèl·lules és independent del creixement de colònies a les plaques d'agar, mentre que el recompte de cèl·lules viables és una tècnica basada en el creixement i depèn del creixement de colònies microbianes a les plaques d'agar.
La informació gràfica següent resumeix la diferència entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables.
Resum: recompte total de cèl·lules vs recompte de cèl·lules viables
El recompte total de cèl·lules enumera tant les cèl·lules microbianes vives com les mortes, mentre que el recompte de cèl·lules viables només enumera les cèl·lules vives. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el recompte total de cèl·lules i el recompte de cèl·lules viables. A més, el recompte de cèl·lules viables és una tècnica basada en el creixement, a diferència del recompte total de cèl·lules. A més, requereix la incubació de plaques fins a aconseguir les colònies visibles. El recompte de plaques viables, el MPN i la filtració de membrana són poques tècniques de recompte de cèl·lules viables, mentre que la microscòpia directa i l'ús de l'hemocitòmetre són dues tècniques de recompte total de cèl·lules.
