La diferència clau entre la seqüenciació de nanopores i il·luminació és que la seqüenciació de nanoporos és una tècnica de seqüenciació de tercera generació que utilitza un nanopor per detectar la seqüència d'una molècula d'ADN, mentre que la seqüenciació d'il·luminació és una tècnica de seqüenciació de segona generació que utilitza reversibles. tecnologia de terminadors de colorants per detectar la seqüència d'una molècula d'ADN.
La seqüenciació d'ADN és la determinació d'una seqüència precisa de nucleòtids o bases d'una molècula d'ADN. Hi ha molts mètodes ràpids per determinar seqüències d'àcids nucleics que acceleren els descobriments d'investigació biològica i mèdica. Una de les primeres tècniques de seqüenciació de l'ADN (seqüenciació Sanger) va ser desenvolupada per Frederick Sanger l'any 1975 mitjançant l'adopció de l'estratègia d'extensió del primer al Centre MRC, Cambridge, Regne Unit. Avui en dia, la majoria de les tècniques de seqüenciació ràpida d'ADN pertanyen a les categories de seqüenciació d'ADN de segona generació (de propera generació) i de tercera generació. La seqüenciació de nanopores i il·luminació són dues noves tecnologies d'ADN.
Què és la seqüenciació de nanopors?
La seqüenciació de nanopors és una tècnica de seqüenciació de tercera generació que utilitza un nanopor de proteïnes per detectar la seqüència d'àcids nucleics d'una molècula d'ADN. En la seqüenciació de nanopors, l'ADN que passa pel nanopor canvia el seu corrent. Aquest canvi depèn de la forma, mida i longitud de la seqüència d'ADN. El senyal resultant es descodifica per obtenir la seqüència específica d'ADN o ARN. Aquest mètode no requereix nucleòtids modificats i funciona en temps real.
Figura 01: seqüenciació de nanopors
Oxford Nanopore Technologies és una empresa popular que fabrica nombrosos dispositius de seqüenciació de nanoporos. La majoria dels dispositius de seqüenciació Oxford Nanopore tenen cèl·lules de flux. Aquesta cèl·lula de flux té una sèrie de nanopors diminuts que estan incrustats a la membrana electroresistent. Cada nanopor correspon al seu propi elèctrode. Aquest elèctrode es connecta a un canal i un xip sensor. Aquest elèctrode mesura el corrent elèctric que flueix pel nanopor. Quan una molècula passa per un nanopor, el seu corrent canvia o s'interromp. A més, aquesta interrupció produeix un gargot característic. A continuació, aquest gargot es descodifica per determinar la seqüència d'ADN o ARN en temps real.
Què és la seqüenciació d'Illumina?
La seqüenciació d'Illumina és una tècnica de seqüenciació de segona generació que utilitza tecnologia de terminadors de colorants reversibles per detectar la seqüència de molècules d'ADN. L'empresa Solexa, que ara forma part de l'empresa Illumina, es va fundar l'any 1998. Aquesta empresa va inventar aquest mètode de seqüenciació basat en la tecnologia de terminadors de colorants reversibles i en polimerases dissenyades.
Figura 02: Seqüenciació d'Illumina
En el mètode de seqüenciació d'il·luminació, la mostra es divideix primer en seccions curtes. Per tant, en la seqüenciació d'il·luminació, al principi es creen lectures curtes o fragments de 100-150 pb. A continuació, aquests fragments es lliguen a adaptadors genèrics i es recuit a una diapositiva. La PCR es fa per amplificar cada fragment. Això crea un punt amb moltes còpies del mateix fragment. Més tard, es separen en monocatenaris i se sotmeten a seqüenciació. La diapositiva de seqüenciació conté nucleòtids marcats fluorescentment, ADN polimerasa i un terminador. A causa del terminador, només s'afegeix una base alhora. S'elimina cada terminador de cicle i permet afegir la següent base al lloc. A més, a partir de senyals fluorescents, l'ordinador detecta la base afegida en cada cicle. La tecnologia de seqüenciació d'Illumina construeix la seqüència en un termini de 4 a 56 hores.
Quines similituds hi ha entre la seqüenciació de Nanopore i Illumina?
- La seqüenciació de nanopores i il·luminació són dues tècniques de seqüenciació.
- Tots dos són mètodes de seqüenciació ràpids i nous.
- S'utilitzen per detectar seqüències d'ADN i ARN.
- Tots dos tenen una alta precisió.
Quina diferència hi ha entre la seqüenciació Nanopore i Illumina?
La seqüenciació de nanopors és una tècnica de seqüenciació de tercera generació que utilitza un nanopor per detectar la seqüència de molècules d'ADN. En canvi, la seqüenciació d'il·luminació és una tècnica de seqüenciació de segona generació que utilitza tecnologia de terminadors de colorants reversibles per detectar la seqüència de molècules d'ADN. o, aquesta és la diferència clau entre la seqüenciació de nanopores i il·luminació. A més, la seqüenciació de nanoporos té una precisió del 92-97%, mentre que la seqüenciació d'il·luminació té una precisió del 99%.
La infografia següent mostra les diferències entre la seqüenciació de nanopores i il·luminació en forma tabular.
Resum: Nanopore vs Seqüenciació Illumina
Les tècniques de seqüenciació d' alt rendiment inclouen mètodes de seqüenciació de segona generació (lectura curta) i tercera generació (lectura llarga). La seqüenciació de nanoporos i il·luminació són dues noves tecnologies d'ADN que pertanyen a les categories de seqüenciació d'ADN de tercera i segona generació (propera generació). La seqüenciació de nanopores utilitza un nanopor per detectar la seqüència de molècules d'ADN. D' altra banda, la seqüenciació d'il·luminació utilitza tecnologia de terminadors de colorants reversibles per detectar la seqüència de molècules d'ADN. Per tant, aquest és el resum de la diferència entre la seqüenciació de nanopores i il·luminació.
