La diferència clau entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1 és que el fragment de Klenow és una gran part de l'ADN polimerasa 1 que no té activitat exonucleasa de 5' a 3', mentre que l'ADN polimerasa és un enzim d'E. coli que té les tres. dominis que inclouen l'activitat exonucleasa de 5' a 3'.
ADN polimerasa és un dels enzims clau implicats en la replicació de l'ADN en organismes vius. Hi ha diferents formes d'enzim ADN polimerasa que es troben en eucariotes i procariotes en funció de la mida i la forma. L'ADN polimerasa 1, 2 i 3 només es troben en organismes procariotes i tenen diferents papers en la replicació de l'ADN. L'ADN polimerasa 1 té tres dominis amb activitat de 5′ a 3′ polimerasa, 3′ a 5′ activitat d'exonucleasa i 5′ a 3′ activitat d'exonucleasa. El fragment de Klenow és un producte proteolític de l'ADN polimerasa 1. Posseeix activitats d'exonucleasa de 5 a 3′ de polimerasa i de 3′ a 5′ de l'ADN polimerasa 1 intacta, però no té l'activitat d'exonucleasa de 5′ a 3′.
Què és Klenow Fragment?
El fragment de Klenow és una gran part de l'ADN polimerasa 1. A diferència de l'ADN polimerasa 1, l'activitat exonucleasa de 5' a 3' no es veu al fragment de Klenow ja que no té el domini de l'exonucleasa de 5' a 3'. Els fragments de Klenow es produeixen digerint l'ADN polimerasa 1 amb una proteasa anomenada subtilisina, que és un enzim digeridor de proteïnes. En algunes aplicacions, l'activitat exonucleasa de 3' a 5' del fragment de Klenow esdevé indesitjable. Es pot eliminar introduint una mutació en el gen que codifica el fragment de Klenow. L'enzim resultant que només té l'activitat de la polimerasa de 5' a 3' es coneix com el fragment exo-Klenow. Morfològicament, el fragment de Klenow s'assembla a la mà dreta humana. Té un domini d'exonucleasa N-terminal 3′-5′ i el domini de la polimerasa C-terminal separats per uns 30 A.
Figura 01: fragment de Klenow i DNA polimerasa 1
El fragment de Klenow és una eina important en les tècniques de biologia molecular. Els fragments de Klenow tenen múltiples usos. Són extremadament importants en la clonació d'extrems roms per tal de produir fragments roms. Els fragments de Klenow poden eliminar voladissos de 3 ′ o omplir voladissos de 5 ′ per formar extrems roms. A més, els fragments de Klenow s'utilitzen per sintetitzar ADN de doble cadena a partir de cadenes simples. A més, s'utilitzen per preparar sondes marcades radioactivament utilitzant l'activitat de l'ADN polimerasa depenent de l'ADN de 5' a 3'.
Què és l'ADN polimerasa 1?
ADN polimerasa 1 (Pol 1) és un enzim que es troba als procariotes que és necessari per a la replicació de l'ADN bacterià. És el primer tipus d'ADN polimerasa descobert per Arthur Kornberg l'any 1956. Pol 1 és la polimerasa més abundant a E. coli. Està codificat pel gen polA i està format per 928 aminoàcids. Consta de tres dominis. Els tres dominis compleixen funcions diferents. Dos dominis duen a terme l'activitat d'exonucleasa de 5' a 3' i l'activitat d'exonucleasa de 3' a 5'. A causa d'aquesta activitat que posseeix Pol 1, és popular com a enzim reparador de l'ADN en lloc d'un enzim que replica l'ADN. El tercer domini té la capacitat de catalitzar múltiples polimeritzacions (de 5' a 3') abans d'alliberar l'ADN plantilla i connectar els fragments d'Okazaki entre si omplint ADN nou i eliminant els primers d'ARN..
Figura 02: DNA polimerasa
Pol 1 aïllat d'E coli es va utilitzar àmpliament en aplicacions moleculars. Tanmateix, un cop descoberta la polimerasa Taq, va substituir l'E Coli Pol 1 en la tecnologia PCR. La Taq polimerasa és una espècie d'ADN polimerasa termoestable que pertany a Pol 1.
Quines similituds hi ha entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1?
- El fragment de Klenow és una gran part de l'ADN polimerasa 1.
- Tenen activitat de l'ADN polimerasa de 5' a 3' depenent de l'ADN i activitat exonucleasa de 3' a 5' que medien la correcció de proves.
- S'utilitzen per a diversos propòsits.
Quina diferència hi ha entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1?
La diferència clau entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1 és que el fragment de Klenow no té activitat exonucleasa de 5' a 3' mentre que l'ADN polimerasa 1 té activitat exonucleasa de 5' a 3'. Per tant, el fragment de Klenow té dos dominis, mentre que l'ADN polimerasa 1 té els tres dominis.
La infografia a continuació mostra més detalls de la diferència entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1.
Resum - Fragment de Klenow vs ADN polimerasa 1
La DNA polimerasa 1 és un enzim d'E. coli que té tres dominis com a domini de polimerització de 5' a 3', domini d'exonucleasa de 3' a 5' i domini d'exonucleasa de 5' a 3'. El fragment de Klenow és una gran part de l'ADN polimerasa. Li manca un domini de l'ADN polimerasa 1, que és el domini de l'exonucleasa de 5' a 3'. La diferència clau entre el fragment de Klenow i l'ADN polimerasa 1 és que els fragments de Klenow no tenen un domini d'exonucleasa de 5' a 3' mentre que l'ADN polimerasa 1 té un domini d'exonucleasa de 5' a 3'.
