PCR vs PCR en temps real
PCR o reacció en cadena de la polimerasa és un descobriment revolucionat en la biologia molecular moderna, que va ser desenvolupat per primera vegada pel químic Kary Mullis l'any 1983. Permet amplificar una sola seqüència d'un ADN complex per a l'anàlisi. La idea bàsica de la PCR és que dos cebadors, que són complementaris a les cadenes oposades d'una seqüència d'ADN, s'orienten l'un cap a l' altre; els cebadors produeixen cadenes complementàries, cadascuna conté l' altra cebador. Per tant, el resultat és una gran quantitat d'una seqüència corresponent a l'ADN que es troba entre els dos cebadors. L'enzim ADN polimerasa s'utilitza per estendre els primers en la PCR. L'ADN polimerasa és un enzim termoestable i té la capacitat de sobreviure a altes temperatures (entre 94 i 95 °C) que s'utilitza per a la desnaturalització de l'ADN plantilla.
La PCR inclou tres passos, a saber, rondes repetides de desnaturalització, recuit d'encebadors i síntesi d'ADN. Per realitzar aquesta reacció s'utilitza una màquina termocicladora de manera que es pugui programar per canviar les temperatures de manera ràpida i precisa. Les aplicacions de la PCR són investigacions criminals, empremtes digitals d'ADN, detecció de patògens i anàlisi de l'ADN de les primeres espècies humanes.
Què és la PCR convencional?
Hi ha tres etapes principals de la PCR convencional, és a dir; Etapa d'amplificació de l'ADN, separació de PCR i detecció de productes. La separació dels segments d'ADN es fa normalment per electroforesi en gel d'agarosa. A continuació, els productes es tenyeixen amb bromur d'etheiduim. Finalment, la detecció s'aconsegueix mitjançant la visualització de bandes sobre gels sota llum UV. Per tant, els resultats finals de la PCR convencional no s'expressen com a nombres. Normalment, la PCR convencional només és capaç de detectar un únic paràmetre.
Què és la PCR en temps real?
La PCR en temps real pot detectar l'amplificació dels productes, ja que els productes es sintetitzen. Amb el desenvolupament de la tecnologia, la PCR s'ha convertit en una tècnica molt popular, especialment per a la detecció i identificació de bacteris en els aliments. La PCR en temps real utilitza un sistema de tint fluorescent i un termociclador equipat amb una capacitat de detecció de fluorescents.
Quina diferència hi ha entre la PCR convencional i la PCR en temps real?
• La PCR convencional requereix més temps, ja que utilitza electroforesi en gel per analitzar els productes de PCR amplificats. En canvi, la PCR en temps real requereix menys temps, ja que pot detectar amplificacions durant les primeres fases de la reacció.
• La PCR en temps real recull dades a la fase de creixement exponencial de la PCR, mentre que la PCR tradicional recull dades al punt final de la reacció.
• És possible que els resultats del punt final de la PCR convencional no siguin molt precisos, però els resultats de la PCR en temps real són molt precisos.
• La PCR en temps real és més sensible que la PCR convencional.
• La PCR convencional té una resolució molt baixa, mentre que la PCR en temps real pot detectar molt pocs canvis a causa de l' alta resolució.
• La detecció del punt final de la PCR convencional té un rang dinàmic curt, mentre que la detecció de PCR en temps real té un ampli rang dinàmic.
• A diferència de la PCR convencional, les tècniques de detecció automatitzada es troben a la PCR en temps real.
• La PCR convencional és molt sofisticada i requereix més mà d'obra que la PCR en temps real.
• A diferència de la PCR en temps real, la PCR convencional no pot discriminar entre bacteris morts i vius.
• La PCR en temps real utilitza un sistema de tint fluorescent per detectar els productes, mentre que la PCR convencional utilitza bromur d'etidi i llum UV per visualitzar bandes en el medi de gel d'agarosa.
