Diferència clau: clonació vs subclonació
La clonació i la subclonació són procediments biològics moleculars que creen cèl·lules o organismes genèticament idèntics que porten l'ADN o el gen que són d'interès. La clonació és una tècnica que implica la inserció del gen o ADN interessat en un vector, la replicació d'aquest dins d'un bacteri hoste i la producció de cèl·lules o organismes que són còpies exactes de la constitució genètica. La subclonació és una tècnica que implica la inserció del gen d'interès, que ja està inserit en un vector, en un vector secundari, la replicació d'aquest dins d'un bacteri hoste i la producció de còpies genèticament idèntiques de cèl·lules o organismes. La diferència clau entre la clonació i la subclonació és que, en la clonació, el gen d'interès, un cop lligat a un vector, continua el procés de clonació mentre que, en la subclonació, el gen d'interès ja clonat es separa del vector pare i s'insereix de nou a la clonació. un vector de destinatari i continueu el procés.
Què és la clonació?
La clonació és el procediment que produeix organismes o cèl·lules genèticament idèntics. A la natura, la clonació es produeix en els mitjans de reproducció asexual. Quan no hi ha recombinació o alteració genètica, les cèl·lules filles reben la mateixa composició genètica de les progenitores. Els organismes procariotes i eucariotes creen clons per fissió binària, brotació, mitosi, etc. En biologia molecular, la clonació de gens o fragments específics d'ADN és un mètode popular per estudiar l'estructura i la funció d'aquesta secció d'ADN en particular.
L'objectiu principal de la clonació molecular és fer milions de còpies de cèl·lules o organismes genèticament idèntics que porten el fragment d'ADN d'interès (principalment gens). Crea organismes amb còpies genètiques exactes d'un altre. Principalment, es clonen gens específics en estudis moleculars per obtenir informació estructural i funcional i per a la seqüenciació de l'ADN. A més, per a la producció de proteïnes específiques o productes a gran escala, la clonació s'utilitza àmpliament.
Procediment de clonació
Els passos bàsics del procediment de clonació són els següents.
- Identificació i aïllament del gen d'interès. (Amplificació del gen d'interès per PCR).
- Digestió de restricció del gen d'interès (l'endonucleasa de restricció talla el gen).
- Digestió restrictiva del vector DNA. (El DNA vectorial també es talla amb la mateixa endonucleasa de restricció).
- Inserció del gen en el vector i formació de la molècula recombinant.
- Transformació del vector recombinant en un bacteri hoste.
- Aïllament i identificació dels bacteris transformats (el vector plasmidi ha de contenir un gen seleccionable, més habitualment un gen de resistència als antibiòtics per detectar els bacteris transformats).
- Expressió gènica recombinant dins de l'amfitrió.
Figura_01: procediment de clonació
Què és la subclonació?
La subclonació és un procediment per moure un gen d'interès d'un vector a un altre per veure l'expressió del gen per obtenir la funcionalitat desitjada del gen. En aquest mètode, hi intervenen dos vectors; és a dir, vector pare i vector de destinació. Les insercions clonadas es mouen de nou a un segon vector en la subclonació. L'objectiu de transferir el gen del primer vector al segon vector és obtenir quelcom que no podria fer el primer vector o separar un gen de nou dins del fragment d'ADN ja clonat i expressar-lo sol. En aquest procediment s'utilitzen enzims de restricció al principi.
Procediment de subclonació
Els passos bàsics de la subclonació són els següents.
- Amb l'ajuda d'endonucleases de restricció, separació de l'ADN d'interès en el plasmidi donant (vector pare).
- Amplificació de l'ADN d'interès mitjançant PCR.
- Purificació del producte de PCR (ADN d'interès) mitjançant electroforesi en gel.
- Obertura del plasmidi receptor per les mateixes endonucleases de restricció utilitzades per separar l'ADN d'interès en el plasmidi pare.
- Lligadura de l'ADN d'interès (gen) al plasmidi receptor per crear el plasmidi subclonat.
- Transformació del vector subclonat en un bacteri hoste competent.
- Detecció de cèl·lules transformades.
- Purificació de l'ADN plasmidiós i ús per a la seqüenciació d'ADN o l'expressió dels gens per obtenir els productes desitjats.
La subclonació es duu a terme en ocasions d'aïllar un gen del grup de gens clonats o quan es requereix que el gen d'interès es transfereixi a un plasmidi útil per veure la funció exacta del gen d'interès..
Figura_02: procediment de subclonació
Quina diferència hi ha entre la clonació i la subclonació?
Clonació vs subclonació |
|
| La clonació és el procediment que produeix organismes o cèl·lules genèticament idèntics. | La subclonació és un procediment per moure un gen d'interès d'un vector a un altre vector per veure l'expressió del gen per obtenir la funcionalitat desitjada del gen. |
| Procés | |
| Separar l'ADN d'interès de l'organisme i inserir-lo en un vector una vegada i clonar | El DNA ja clonat es separa del primer vector i s'insereix en un segon vector i es clona. |
| Insereix el moviment mitjançant vectors | |
| No mou les insercions (ADN d'interès) d'un vector a un altre. | Mou les insercions del vector principal al vector de destinació. |
Resum: clonació vs subclonació
La clonació crea cèl·lules o organismes genèticament idèntics amb el gen o ADN d'interès inserit. Procedeix mitjançant la separació i inserció de l'ADN d'interès en un vector i l'expressió dins d'un bacteri hoste. La subclonació comparteix passos similars amb la clonació. Tanmateix, en la subclonació, el fragment d'ADN ja clonat (gen d'interès) s'insereix en un vector i es transforma en un bacteri hoste. Aquesta és la diferència clau entre la clonació i la subclonació.
