Diferència clau: taca de Gram vs àcid ràpid
Els bacteris són microorganismes molt petits. Són transparents i la seva detecció és difícil en condicions de vida i sense taques. Així, es desenvolupen diversos mètodes de tinció per facilitar la detecció bacteriana. Hi ha tres tipus principals de tècniques de tinció: tinció simple, tinció diferencial i tinció estructural. La tinció diferencial és una tècnica que utilitza més d'una tinció per diferenciar bacteris. La tinció de Gram i la tinció àcid-resistent es coneixen més popularment com a taques diferencials. La tinció de Gram és una tècnica de tinció diferencial, que separa els bacteris en dos grups coneguts com a bacteris Gram-positius i bacteris Gram-negatius. La taca àcid-resistent és una taca diferencial que s'utilitza per identificar organismes àcid-resistents com Mycobacterium d'organismes no àcid-resistents. Aquesta és la diferència clau entre la tinció de Gram i la tinció àcid Fast.
Què és la taca de Gram?
La tinció de Gram és una tècnica de tinció diferencial important utilitzada per a la identificació de bacteris en microbiologia. Aquesta tècnica va ser introduïda pel bacteriòleg danès Hans Christian Gram l'any 1884. La tinció de Gram classifica els bacteris en dos grans grups anomenats gram positius i gramnegatius, que són molt importants en la classificació i identificació bacteriana. Els microbiòlegs realitzen la tinció de gram com a pas inicial en la caracterització bacteriana durant els seus estudis.
Els bacteris s'agrupen en funció de les diferències de la seva paret cel·lular. Els bacteris Gram positius es componen d'una capa gruixuda de peptidoglicà a la seva paret cel·lular, mentre que els bacteris Gram negatius es compon d'una fina capa de peptidoglicà a la seva paret cel·lular. El resultat de la tinció de gram es basarà en la diferència en el gruix de la capa de peptidoglicà de la paret cel·lular.
La tinció de Grams es realitza amb quatre reactius diferents, a saber; taca primària, mordent, agent decolorant i contrataca. El violeta de cristall i la safranina s'utilitzen com a taques primàries i de contrast, respectivament, mentre que els grams de iode i el 95% d'alcohol s'utilitzen com a mordent i decolorant, respectivament. Els passos bàsics de la taca de grams són els següents:
- Es prepara un frotis bacterian sobre un portaobjectes de vidre net, es fixa amb calor i es refreda.
- El frotis s'inunda amb cristall violeta durant 1 o 2 minuts.
- El frotis s'esbandeix amb aigua corrent lent de l'aixeta per eliminar l'excés de taques.
- S'aplica grams de iode al frotis durant 1 minut.
- El frotis s'esbandeix amb aigua de l'aixeta corrent lent
- El frotis es renta amb alcohol al 95% durant 2-5 segons i es renta amb aigua de l'aixeta corrent lent.
- El frotis es taca amb safranina durant 1 minut
- El frotis s'esbandeix amb aigua corrent lent de l'aixeta, s'asseca i s'observa al microscopi.
Al final de la tinció de Gram, els bacteris Gram negatius s'observaran de color rosa mentre que els bacteris Gram positius s'observaran de color porpra.
Figura 01: bacteris gramnegatius i grampositius
El resultat de la tinció de grams es decideix pel gruix de la capa de peptidoglicà de la seva paret cel·lular. Durant l'etapa de decoloració, la taca primària i el mordent s'eliminen fàcilment dels bacteris gramnegatius i es tornen incolors ja que tenen una fina capa de peptidoglicà. La taca primària es manté en els bacteris gram positius ja que tenen una capa gruixuda de peptidoglicà. La contrataca no serà efectiva per als bacteris gram positius a causa de la retenció de la taca primària. Així, els bacteris gram-positius seran visibles en el color primari de la taca, és a dir, el color porpra. La taca de comptador tacarà els bacteris gramnegatius i seran visibles amb el color de la selecció, que és el color de la safranina. Per tant, és fàcil classificar els bacteris en dos grups per tinció de Gram i és valuós per a la diferenciació i identificació bacteriana.
Què és Acid Fast?
La resistència a l'àcid és una propietat física de certs bacteris, concretament la seva resistència a la decoloració per àcids durant els procediments de tinció. Un cop tenyits, aquests organismes resisteixen els procediments de decoloració basats en etanol o àcids diluïts habituals en molts protocols de tinció. Així, s'anomena "àcid ràpid" a aquests organismes. Aquesta propietat es demostra a causa de tenir un alt nivell de material cerós (àcids micòlics) a les seves parets cel·lulars. Aquesta prova és fonamental per a la identificació de Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: Micobacteris àcids ràpids
Aquesta taca àcid ràpida va ser desenvolupada per Paul Ehrlich l'any 1882. La tècnica àcid ràpida d'Ehrlich va ser modificada per Ziehl-Neelsen i ara s'utilitza amb més freqüència. El procediment de tinció àcid ràpid implica tres reactius diferents. Carbol fuschin s'utilitza com a taca primària. L'alcohol àcid s'utilitza com a agent decolorant. El blau de metilè s'utilitza com a contrataca. El procediment de tinció es realitza de la següent manera.
- La tinció primària (carbol fucsina) s'aplica a la mostra fixa del portaobjectes (totes les cèl·lules es tindran de color vermell).
- La diapositiva s'escalfa al vapor durant 5 minuts, la qual cosa introdueix les taques a les cèl·lules correctament.
- A continuació s'afegeix la solució decolorant (Això elimina el colorant vermell de totes les cèl·lules excepte els bacteris àcid-resistents).
- El blau de metilè s'afegeix com a contrataca (acoloreix totes les cèl·lules bacterianes decoloritzades).
- Els bacteris àcid ràpid es mantenen vermells mentre que els bacteris no àcids es taquen de blau.
Quines similituds hi ha entre la tinció de Gram i l'àcid ràpid?
- La tinció de Gram i l'àcid ràpid són dues tècniques de tinció diferencials.
- Les dues tècniques classifiquen els bacteris en dos grups.
- Les dues tècniques utilitzen dues taques i una decoloració.
Quina diferència hi ha entre la tinció de Gram i l'àcid ràpid?
Taca de Gram vs Àcid Fast |
|
| La tinció de Gram és una tècnica de tinció diferencial, que separa els bacteris en dos grups, bacteris Gram-positius i bacteris Gram-negatius. | La tinció àcid ràpida és una taca diferencial que s'utilitza per identificar organismes àcid-resistents d'organismes no àcid-resistents. |
| Taca primària | |
| El violeta cristal·lí és la tinció primària que s'utilitza habitualment en la tinció de grams. | Carbol fucsina és la taca principal que s'utilitza en l'àcid ràpid. |
| Agent decolorant | |
| El 95% d'alcohol s'utilitza com a agent decolorant a la taca de gram. | L'alcohol àcid s'utilitza com a agent decolorant en àcid ràpid. |
| Taca de comptador | |
| La taca de Gram utilitza safranina com a contrataca. | La taca d'àcid ràpid utilitza el blau de metilè com a contrataca. |
| Observació | |
| Els bacteris Gram negatius s'observen en color de picada i els bacteris Gram positius s'observen en color morat. | Els bacteris àcid-resistents s'observen en color vermell i els bacteris no àcid-resistents s'observen en color blau. |
Resum: tinció de Gram vs àcid ràpid
La visualització de microorganismes en estat viu és difícil. Per tant, les taques biològiques i els procediments de tinció s'utilitzen àmpliament per estudiar les seves propietats. La tinció diferencial és un tipus de tècnica de tinció que s'utilitza per diferenciar bacteris. La tinció de Gram i la tinció àcid ràpida són dues tècniques de tinció diferencial. La tinció de Gram diferencia els bacteris gramnegatius i grampositius en funció del gruix de les seves parets cel·lulars. La tinció àcid ràpida diferencia els bacteris àcid ràpid dels bacteris no àcids ràpids en funció del contingut d'àcid micòlic a la paret cel·lular. Aquesta és la diferència entre l'àcid ràpid i la taca de gram.
Baixa la versió PDF de la tinció de Gram vs Acid Fast
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons la nota de citació. Si us plau, descarregueu la versió PDF aquí Diferència entre la tinció de Gram i l'àcid ràpid.
