Diferència clau: pàgina SDS vs Western Blot
El Western blotting és una tècnica que detecta una proteïna específica d'una mostra de proteïna. Aquesta tècnica es realitza mitjançant diversos passos clau: electroforesi en gel, blotting i hibridació. L'electroforesi en gel de poliacrilamida de dodecil sulfat de sodi (SDS Page) és una mena de tècnica d'electroforesi en gel que s'utilitza per separar proteïnes segons les seves mides (pesos moleculars). Western blot és un full especial d'una membrana de blotting que s'utilitza per transferir el mateix patró de les proteïnes a la pàgina SDS. La diferència clau entre SDS Page i western blot és que SDS Page permet la separació de proteïnes en una barreja, mentre que el western blot permet la detecció i quantificació d'una proteïna específica a partir d'una barreja. Tots dos són útils en estudis d'anàlisi de proteïnes.
Què és la pàgina SDS?
La pàgina SDS és una tècnica d'electroforesi en gel utilitzada per a la separació de proteïnes. S'utilitza habitualment en bioquímica, genètica, medicina forense i biologia molecular. Un cop extretes les proteïnes de la mostra, s'executen sobre un gel format per SDS i poliacrilamida. SDS és un detergent aniònic que s'utilitza per linealitzar proteïnes (desnaturalitzar proteïnes) i per impartir una càrrega negativa a les proteïnes linealitzades proporcional a la seva massa molecular. La poliacrilamida es converteix en el suport sòlid del gel. Les proteïnes desnaturalitzades que estan carregades negativament migren cap a l'extrem positiu de l'aparell a través del gel. Segons les mides de les proteïnes, les velocitats de migració difereixen entre proteïnes i es produeix la separació. Per tant, la pàgina SDS és útil per a la separació de proteïnes individuals en funció de les seves mides.
La preparació del gel de poliacrilamida per al fraccionament de proteïnes és un pas crucial a la pàgina SDS. La concentració correcta de poliacrilamida i el tipus d'agent de reticulació utilitzat afecten molt les propietats físiques del gel, la qual cosa fa que la separació real de les diferents proteïnes. Les mides dels porus del gel s'han de gestionar adequadament per a una separació efectiva. Tanmateix, la pàgina SDS es considera una tècnica de separació de proteïnes d' alta resolució.
La tècnica de la pàgina SDS té una limitació important en l'anàlisi de proteïnes. Com que l'SDS desnaturalitza les proteïnes abans de la separació, no permet la detecció d'activitat enzimàtica, interaccions d'unió a proteïnes, cofactors de proteïnes, etc.
Figura 01: Pàgina SDS
Què és Western Blot?
La tècnica de Western blotting permet detectar una proteïna específica a partir d'una barreja de proteïnes i mesurar la quantitat i el pes molecular de la proteïna. Western blot és la membrana utilitzada durant el procediment de blotting per obtenir la imatge mirall dels patrons de proteïnes en el gel de poliacrilamida SDS. La membrana que s'utilitza per al western blotting està formada principalment per nitrocel·lulosa o difluorur de polivinilidè (PVDF). La membrana amb la proteïna transferida es pot utilitzar per identificar la proteïna desitjada. Requereix anticossos d' alta qualitat per a la detecció de la proteïna desitjada per hibridació. L'anticòs s'uneix al seu antigen específic i revela la presència de l'antigen desitjat que és una proteïna.
La transferència de les proteïnes del gel de poliacrilamida SDS al western blot es realitza mitjançant electroblotting. És un mètode eficaç i ràpid que fa que les proteïnes s'electroforesin fora del gel i passin a la membrana de nitrocel·lulosa (western blot).
Figura 02: Western Blot
Quina diferència hi ha entre SDS Page i Western Blot?
Pàgina SDS vs Western Blot |
|
| La pàgina SDS és una tècnica d'electroforesi en gel. | El Western blot és una tècnica que es realitza sobre una membrana per detectar una proteïna específica d'una barreja. |
| Utilitzar | |
| La pàgina SDS permet separar les proteïnes segons les seves mides. | El Western blot permet la transferència de proteïnes al gel de la pàgina SDS sense canviar el seu patró i permet la hibridació amb anticossos específics. |
| Desavantatges | |
| La desnaturalització de proteïnes, l' alt cost i la presència de substàncies químiques de neurotoxines són els desavantatges d'aquesta tècnica. | Aquesta tècnica requereix molt de temps i requereix una bona experiència personal i condicions específiques controlades. |
Resum – Pàgina SDS vs Western Blot
La pàgina SDS i el western blot són dos mètodes implicats en l'anàlisi de proteïnes. La pàgina SDS permet separar fàcilment les proteïnes en un gel segons el seu pes molecular. Western blot ajuda a confirmar la presència i la quantitat d'una proteïna específica mitjançant la hibridació amb anticossos específics. Aquesta és la diferència entre SDS Page i Western blot.
