Diferència clau: citometria de flux vs FACS
En el context de la teoria cel·lular, les cèl·lules són la unitat estructural i funcional bàsica de tots els organismes vius. La classificació cel·lular és una metodologia que s'utilitza per separar diferents cèl·lules segons les característiques fisiològiques i morfològiques. Poden ser de característiques intracel·lulars o extracel·lulars. La interacció de l'ADN, l'ARN i les proteïnes es consideren propietats interactives intracel·lulars, mentre que la forma, la mida i les diferents proteïnes de superfície es consideren propietats extracel·lulars. En la ciència actual, les metodologies de classificació cel·lular han donat suport a les diferents investigacions en estudis biològics i també a l'establiment de nous principis a través de la investigació en medicina. La classificació cel·lular es realitza amb diverses metodologies que inclouen tant primitives amb menys equipament com metodologies tecnològiques avançades amb l'ús de maquinària sofisticada. La citometria de flux, la classificació de cèl·lules activades fluorescents (FACS), la selecció de cèl·lules magnètiques i la classificació de cèl·lules individuals són les principals metodologies utilitzades. La citometria de flux i el FACS es desenvolupen per diferenciar cèl·lules segons les seves propietats òptiques. FACS és un tipus especialitzat de citometria de flux. La citometria de flux és una metodologia que s'utilitza durant l'anàlisi d'una població heterogènia de cèl·lules segons diferents molècules de superfície cel·lular, mida i volum que permet la investigació de cèl·lules individuals. FACS és un procés pel qual una mostra de barreja de cèl·lules s'ordena segons les seves característiques de dispersió de la llum i fluorescència en dos o més contenidors. Aquesta és la diferència clau entre la citometria de flux i el FACS.
Què és la citometria de flux?
La citometria de flux és un mètode que s'utilitza per examinar i determinar l'expressió de molècules intracel·lulars i la superfície cel·lular i per definir i caracteritzar diferents tipus de cèl·lules. També s'utilitza per determinar el volum cel·lular i la mida cel·lular i per avaluar la puresa de les subpoblacions que estan aïllades. Això permet l'avaluació de diversos paràmetres de cèl·lules individuals aproximadament al mateix temps. La citometria de flux s'utilitza per mesurar la intensitat de la fluorescència que es produeix a causa dels anticossos marcats amb fluorescència que ajuden a identificar proteïnes o lligands que s'uneixen a cèl·lules associades.
Figura 01: citometria de flux
En general, la citometria de flux inclou principalment tres subsistemes. Són els fluids, l'electrònica i l'òptica. En citometria de flux, hi ha cinc components principals disponibles que s'utilitzen en la classificació cel·lular. Són, una cèl·lula de flux (un corrent de líquid que s'utilitza per transportar-les i alinear les cèl·lules per al procés de detecció òptica), un sistema de mesura (pot ser de diferents sistemes que inclouen, làmpades de mercuri i xenó, refrigerats per aigua d' alta potència o làsers de baixa potència refrigerats per aire o làsers de díode), un ADC; Sistema convertidor analògic a digital, sistema d'amplificació i un ordinador per a l'anàlisi. L'adquisició és el procés pel qual es recullen les dades de les mostres mitjançant un citòmetre de flux. Aquest procés està mediat per un ordinador que està connectat amb el citòmetre de flux. El programari present a l'ordinador analitza la informació alimentada a l'ordinador des del citòmetre de flux. El programari també té la capacitat d'ajustar els paràmetres de l'experiment controlant el citòmetre de flux.
Què és FACS?
En el context de la citometria de flux, la classificació de cèl·lules activades per fluorescència (FACS) és un mètode que s'utilitza per diferenciar i classificar una mostra d'una barreja de cèl·lules biològiques. Les cèl·lules es separen de dos o més contenidors. El mètode de classificació es basa en les característiques físiques de la cèl·lula, que inclou la dispersió de la llum i les característiques de fluorescència de la cèl·lula. Aquesta és una tècnica científica important, que es pot utilitzar per obtenir resultats quantitatius i qualitatius fiables dels senyals de fluorescència que s'emeten des de cada cèl·lula. Durant el FACS, inicialment, la barreja de cèl·lules prèviament obtinguda; una suspensió es dirigeix al centre d'un corrent estret de líquid que flueix ràpidament. El flux de líquid està dissenyat per tal de separar les cèl·lules de la suspensió en funció del diàmetre de cada cel·la. S'aplica un mecanisme de vibració al corrent de suspensió que dóna lloc a la formació de gotes individuals.
Figura 02: FACS
El sistema està calibrat per crear una sola gota amb una cel·la. Just abans de la formació de gotes, la suspensió de flux es mou al llarg d'un aparell de mesura de fluorescència que detecta la fluorescència característica de cada cèl·lula. En el punt de formació de les gotes, es col·loca un anell de càrrega elèctrica que s'indueix una càrrega a l'anell abans de la mesura de la intensitat de la fluorescència. Una vegada que les gotes es formen a partir del corrent de suspensió, una càrrega queda atrapada dins de les gotes que després entra en un sistema de deflexió electrostàtica. Segons la càrrega, el sistema desvia les gotes a diferents recipients. El mètode d'aplicació de la càrrega varia segons els diferents sistemes utilitzats en FACS. L'equip utilitzat a FACS es coneix com a classificador de cèl·lules activat per fluorescència.
Quina semblança hi ha entre la citometria de flux i el FACS?
La citometria de flux i el FACS es desenvolupen per diferenciar cèl·lules segons les seves propietats òptiques
Quina diferència hi ha entre la citometria de flux i el FACS?
Citometria de flux vs FACS |
|
| La citometria de flux és una metodologia que s'utilitza durant l'anàlisi d'una població heterogènia de cèl·lules segons diferents molècules de superfície cel·lular, mida i volum que permet la investigació de cèl·lules individuals. | FACS és un procés pel qual una mostra de barreja de cèl·lules s'ordena segons les seves característiques de dispersió de la llum i fluorescència en dos o més contenidors. |
Resum - Citometria de flux vs FACS
La cèl·lula és la unitat estructural i funcional bàsica de tots els organismes vius. La classificació cel·lular és el procés pel qual les cèl·lules s'aïllen i es diferencien en diferents categories en funció de les seves propietats intracel·lulars i extracel·lulars. La citometria de flux i el FACS són dues metodologies importants en la classificació cel·lular. Tots dos processos es desenvolupen per diferenciar cèl·lules segons les seves propietats òptiques. La citometria de flux és una metodologia que s'utilitza durant l'anàlisi d'una població heterogènia de cèl·lules segons diferents molècules de superfície cel·lular, mida i volum que permet la investigació de cèl·lules individuals. FACS és un procés pel qual una mostra de barreja de cèl·lules s'ordena segons les seves característiques de dispersió de la llum i fluorescència en dos o més contenidors. Aquesta és la diferència entre la citometria de flux i la FACS.
Descarregueu la versió PDF de citometria de flux vs FACS
Podeu baixar la versió PDF d'aquest article i utilitzar-la per a finalitats fora de línia segons la nota de citació. Si us plau, descarregueu la versió PDF aquí Diferència entre citometria de flux i FACS
