La diferència clau entre les sondes radioactives i les no radioactives és que les sondes radioactives són seqüències d'ADN o ARN monocatenàries que estan marcades amb isòtops radioactius, mentre que les sondes no radioactives són seqüències d'ADN o ARN monocatenaris que estan marcades amb una etiqueta química o una etiqueta fluorescent.
La hibridació d'àcids nucleics és una tècnica important en biologia molecular, especialment en el diagnòstic microbià. Ajuda a identificar o detectar una determinada seqüència d'àcids nucleics. En aquesta tècnica, els àcids nucleics es fixen a una superfície sòlida i s'hibriditzen amb una sonda. Una sonda és un fragment d'ADN o ARN que és complementari a una seqüència d'interès. Si la seqüència diana està present a la mostra, la sonda s'hibridarà amb ella i la farà detectable. Hi ha dos tipus de sondes com a sondes radioactives i no radioactives. Per tant, podem etiquetar les sondes amb una etiqueta radioactiva o una etiqueta fluorescent.
Què són les sondes radioactives?
Les sondes radioactives són els fragments d'ADN o ARN monocatenaris amb una etiqueta radioactiva. Els radioisòtops s'utilitzen en la preparació de sondes radioactives. Els radioisòtops 32P, 33P i 35S s'utilitzen habitualment en l'etiquetatge de sondes. A més, els radioisòtops 3H i 1251 també s'utilitzen en menor mesura en l'etiquetatge de sondes. Però s'utilitzen per a aplicacions específiques. Entre els diferents radioisòtops, 32P és l'isòtop més utilitzat per marcar sondes radioactives.
Les sondes radioactives proporcionen un major grau de fiabilitat i especificitat. Per tant, proporcionen la màxima sensibilitat i permeten una quantificació precisa de les seqüències diana. Tanmateix, hi ha diversos desavantatges associats a les sondes radioactives. Tenen una vida mitjana curta. A més, són perillosos i la producció, l'ús i l'eliminació són problemàtics a l'hora de manipular-los. A més, la preparació de la sonda radioactiva és un procés costós. Per tant, a causa dels problemes de seguretat i el cost, avui dia les sondes radioactives no s'utilitzen com a sondes no radioactives.
Què són les sondes no radioactives?
Les sondes no radioactives són el segon tipus de sondes que estan marcades químicament. La digoxigenina és una sonda no radioactiva, que és un marcador basat en anticossos. Les sondes de digoxigenina són específiques i sensibles. La biotina és una altra etiqueta utilitzada en la preparació de sondes no radioactives. Els sistemes de detecció de biotina/estreptavidina i digoxigenina/anticossos són les sondes no radioactives més utilitzades en la hibridació. A més, el sistema de peroxidasa de rave picant és un altre sistema de sonda no radioactiu. Una vegada que aquestes sondes no radioactives s'hibriditzen amb les seqüències diana, es poden detectar mitjançant autorradiografia o altres tècniques d'imatge.
Figura 01: hibridació amb sondes no radioactives
Les sondes no radioactives s'utilitzen més sovint en la hibridació d'àcids nucleics que les sondes radioactives. Això es deu al fet que les sondes no radioactives no estan associades amb materials perillosos. A més, els mètodes de detecció no radioactius requereixen temps d'exposició més curts per detectar el senyal d'hibridació. Tanmateix, els passos implicats en la hibridació de l'ADN amb sondes no radioactives solen ser tediosos i requereixen temps. A més, les solucions disponibles comercialment són cares.
Quines similituds hi ha entre les sondes radioactives i les no radioactives?
- Les sondes radioactives i no radioactives són dos tipus de sondes que s'utilitzen en la hibridació d'àcids nucleics.
- Faciliten la detecció de seqüències objectiu a la mostra.
- Els dos tipus de sondes són igualment sensibles i específiques.
Quina diferència hi ha entre les sondes radioactives i les no radioactives?
Les sondes radioactives són les seqüències d'ADN o ARN monocatenari marcades amb isòtops radioactius, mentre que les sondes no radioactives són les seqüències d'ADN o ARN monocatenaris marcades amb una etiqueta química. Per tant, aquesta és la diferència clau entre les sondes radioactives i les no radioactives. A més, els isòtops radioactius són perillosos. Per tant, les sondes radioactives són considerablement perilloses, mentre que les no radioactives no ho són.
A més, una altra diferència entre les sondes radioactives i les no radioactives són els seus desavantatges. Les vides mitjanes curtes i els perills associats a la seva producció, ús i eliminació són els desavantatges de l'ús de sondes radioactives. D' altra banda, els passos implicats en la hibridació de l'ADN amb sondes no radioactives solen ser tediosos i requereixen temps.
A sota de la infografia es mostren més comparacions relacionades amb la diferència entre sondes radioactives i no radioactives.
Resum: sondes radioactives i no radioactives
Una sonda és un fragment d'ADN o ARN que conté una seqüència de nucleòtids que és complementària a la seqüència d'interès. Per detectar la seqüència diana, les sondes es poden marcar de manera radioactiva, fluorescent o química. Les sondes s'uneixen amb seqüències complementàries a la mostra. Les sondes radioactives estan marcades amb isòtops radioactius, mentre que les no radioactives estan marcades amb biotina, digoxigenina o peroxidasa de rave picant. Per tant, aquesta és la diferència clau entre les sondes radioactives i les no radioactives.
