La diferència clau entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa és que en l'ultracentrifugació amb gradient de sacarosa s'utilitza un gradient continu de sacarosa, mentre que en l'ultracentrifugació amb coixí de sacarosa s'utilitza un gradient discontinu de sacarosa.
La ultracentrifugació amb el gradient de sacarosa i el coixí de sacarosa són dos tipus similars de tècniques que s'utilitzen per separar tipus específics de macromolècules. En ambdues tècniques, s'utilitza un gradient de densitat de sacarosa. Però en l'ultracentrifugació amb gradient de sacarosa, s'utilitza un gradient de densitat continu mentre que, en l'ultracentrifugació amb coixí de sacarosa, s'utilitza un gradient de densitat discontinu.
Què és la ultracentrifugació amb gradient de sacarosa?
La ultracentrifugació amb gradient de sacarosa és una tècnica que es pot utilitzar per fraccionar macromolècules com ADN, ARN i proteïnes. Hi ha diversos passos en aquesta tècnica. Són la preparació del gradient de sacarosa, la centrifugació, la separació i l'elució. La preparació del gradient és el pas clau d'aquesta tècnica. En aquesta tècnica, la mostra que conté macromolècules de diferents mides es posa en capes a la superfície d'una columna de gradient de sacarosa. Quan es centrifuguen, macromolècules de diferents mides es sedimenten a través de la columna de gradient de sacarosa a diferents velocitats. La sedimentació depèn de diversos factors, incloent la força de centrifugació, la forma de la mida i la densitat de les macromolècules, la densitat i la viscositat del gradient. Al final de la centrifugació, les macromolècules es separen espacialment per densitat. Les macromolècules més grans (macromolècules d' alta densitat) sedimenten cap al fons. Els més lleugers (macromolècules de baixa densitat) romanen a la part superior del gradient. Per tant, les molècules se separen com a bandes diferents. Aleshores s'han de separar les bandes i s'ha de fer la purificació de la macromolècula específica de la sacarosa.
Figura 01: ultracentrifugació amb gradient de sacarosa
Pel que fa a l'aplicació, aquest mètode s'utilitza àmpliament per al fraccionament de molècules d'ADN. La ultracentrifugació amb gradient de sacarosa s'utilitza habitualment per caracteritzar la mida i la composició del complex proteic. A més, aquesta tècnica s'utilitza per a la purificació parcial de l'ARNm.
Què és la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa?
La ultracentrifugació amb coixí de sacarosa és una altra tècnica que permet el fraccionament de macromolècules. A diferència de l'ultracentrifugació amb gradient de densitat de sacarosa, l'ultracentrifugació amb coixí de sacarosa utilitza un gradient de densitat discontinu. La concentració de sacarosa augmenta de d alt a baix en passos discrets. En aquesta tècnica, la separació s'aconsegueix col·locant l'extracte clarificat a sobre d'un petit volum d'una solució de sacarosa en un tub de centrífuga, l'anomenat coixí de sacarosa. Això permet una millor separació en centrifugació d' alta velocitat. Quan les molècules se separen com una banda entre el coixí de sacarosa, la banda blanca es pot recollir i purificar. A més, les impureses es poden eliminar encara més mitjançant el mètode del coixí de sacarosa. El mètode del coixí de sacarosa permet omplir el 60-70% del tub amb la mostra. Per tant, el mètode del coixí de sacarosa permet processar un volum més gran de mostra.
Quines similituds hi ha entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa?
- La ultracentrifugació amb el gradient de sacarosa i el coixí de sacarosa són dues tècniques que s'utilitzen per separar una barreja de macromolècules.
- En ambdós mètodes, s'utilitza un gradient de sacarosa.
- La centrifugació és un pas en tots dos mètodes.
- Les molècules es sedimenten com a banda o zona en cada mètode.
Quina diferència hi ha entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa?
La ultracentrifugació amb gradient de sacarosa és una tècnica que utilitza un gradient continu de sacarosa al tub de la centrífuga, mentre que l'ultracentrifugació amb coixí de sacarosa és una tècnica que utilitza un gradient de sacarosa discontinu. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa.
A més, la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa permet processar un volum més gran de la mostra mentre que l'ultracentrifugació amb gradient de sacarosa permet processar un volum relativament baix de la mostra.
A continuació, la infografia tabula més diferències entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa.
Resum: gradient de sacarosa i ultracentrifugació amb coixí de sacarosa
La ultracentrifugació amb gradient de sacarosa separa les macromolècules mitjançant un gradient continu de sacarosa. En canvi, la ultracentrifugació amb coixí de sacarosa utilitza un gradient discontinu de sacarosa per separar un tipus específic de partícules en una barreja. Per tant, aquesta és la diferència clau entre el gradient de sacarosa i la ultracentrifugació del coixí de sacarosa. El mètode del coixí de sacarosa permet la recollida de partícules morfològicament intactes ja que no provoca estrès mecànic, a diferència de l'ultracentrifugació amb gradient de sacarosa, que aixafa les molècules al fons del tub. A més, l'ultracentrifugació amb coixí de sacarosa permet processar un volum més gran de la mostra que l'ultracentrifugació amb gradient de sacarosa.
