La diferència clau entre la tinció de Coomassie i la de plata és que la tinció de coomassie és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza una taca de blau brillant de coomassie, mentre que la tinció d'estella és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza una taca de plata.
La separació i la identificació de proteïnes són passos crítics en l'anàlisi del proteoma. Necessiten caracterització de proteïnes d' alta resolució després de l'electroforesi en gel. Hi ha nombroses tècniques de tinció que inclouen diferents taques com ara colorants aniònics (coomassie brillant blau), cations metàl·lics (imidazol-zinc), tinció de plata i colorants fluorescents, etc. En ocasions també es poden utilitzar sondes radioactives. L'elecció de la tècnica de tinció depèn de la simplicitat, la disponibilitat d'equips d'imatge al laboratori, etc.
Què és la tinció de Coomassie?
La tinció de Coomassie és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza una taca blau brillant de Coomassie. Generalment s'anomena tècnica blau de coomassie. El blau brillant de Coomassie és el colorant proteic aniònic més popular. Aquesta taca normalment tenyeix gairebé totes les proteïnes amb bona linealitat quantitativa a sensibilitat mitjana. La taca blava brillant de Coomassie s'uneix inespecíficament a gairebé totes les proteïnes. Hi ha dues variants diferents de color blau brillant de coomassie: R-250 i G-250. R-250 ofereix temps de tinció més curts, mentre que G-250 està disponible en formulacions més sensibles i respectuoses amb el medi ambient.
Figura 01: tinció de Coomassie
Els colorants Coomassie són molt populars en estudis d'espectrometria de masses i estudis d'identificació de proteïnes. A més, la taca de coomassie biosegura és una formulació no perillosa de coomassie blue G-250 que està disponible actualment al mercat. L'avantatge d'aquesta formulació és que només requereix aigua per esbandir i decolorar. La tinció de coomassie biosegura ofereix una sensibilitat equivalent al blau de coomassie convencional G-250, però millor que la tinció de coomassie R-250. A més, té un protocol de tinció més senzill i ràpid que el blau Coomassie G-250 convencional. L'inconvenient de la tinció de blau coomassie és que és menys sensible en comparació amb la tinció de plata. La tinció de blau de Coomassie és aproximadament 50 vegades menys sensible que la tinció de plata. Tanmateix, a causa de la seva senzillesa en l'enquadernació, es prefereix en molts estudis.
Què és la tinció de plata?
La tinció de plata és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza una taca de plata. La tinció de plata s'utilitza per tenyir gels tant d'agarosa com de poliacrilamida. La tinció de plata de proteïnes en gels d'agarosa va ser desenvolupada per primera vegada el 1973 per Kerenyi i Gallyas. Més tard, es va adaptar per a proteïnes en gels de poliacrilamida que s'utilitzen en SDS-PAGE. Actualment, la tinció de plata també s'utilitza per a la tinció d'ADN o ARN. Per tal de tacar els gels, els gels s'incuben amb una solució de nitrat de plata en aquest mètode. La tinció de plata tenyeix els llocs on hi ha proteïnes de marró a negre.
Figura 02: Tinció de plata
La intensitat de la tinció de plata depèn de l'estructura primària de la proteïna. A més, la neteja dels recipients utilitzats i la puresa dels reactius també poden influir en la qualitat de la tinció de plata. Tanmateix, l'inconvenient de la tinció amb plata és que no és capaç de detectar totes les proteïnes, especialment les glicoproteïnes i les proteïnes amb grans grups modificats units a les seves cadenes laterals..
Quines similituds hi ha entre la tinció de Coomassie i la de plata?
- La tinció de Coomassie i de plata són dues tècniques que s'utilitzen en la tinció de proteïnes.
- Poden tacar tant proteïnes com ADN.
- Les dues tècniques de tinció tenen inconvenients.
- Aquestes tècniques tenen passos semblants, com ara fixar, tenyir i decolorar.
Quina diferència hi ha entre la tinció de Coomassie i la de plata?
La tinció de Coomassie és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza la tinció de blau brillant de Coomassie, mentre que la tinció d'estella és una tècnica de tinció de proteïnes que utilitza una taca de plata. Per tant, aquesta és la diferència clau entre Coomassie i la tinció de plata. A més, la tinció de Coomassie és menys sensible que la tinció de plata.
La infografia següent mostra les diferències entre la tinció de Coomassie i la de plata en forma de taula per comparar-les una al costat de l' altra.
Resum: Coomassie i tinció de plata
Per visualitzar les proteïnes, es pot realitzar una reacció química d'unió de colorants o de coloració específica de proteïnes. Això s'anomena tinció de proteïnes. La tinció de Coomassie i de plata són dues tècniques utilitzades en la tinció de proteïnes. La tècnica de tinció de Coomassie utilitza una taca blava brillant de Coomassie, mentre que la tinció d'estella utilitza una taca de plata. Per tant, aquesta és la diferència clau entre Coomassie i la tinció de plata.
